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機(jī)構(gòu)用戶解決方案

產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

Q-1：使用RNAiso for Small RNA一般情況下的組織或細(xì)胞中所能提取的RNA量是多少?
A-1：一般情況下組織或細(xì)胞中所能提取的Small RNA量如下表（表中所指提取量指提取得到的Small RNA Fragments進(jìn)行OD定量的結(jié)果，其提取量并不代表miRNA含量，且不同組織來(lái)源的Small RNA含量差別較大）：
組織材料 起始樣品量 Small RNA提取量
肝臟 100 mg 約50 μg
HL-60培養(yǎng)細(xì)胞 1×107個(gè) 約15 μg
骨骼肌 100 mg 約15 μg
 
Q-2：有關(guān)RNA的吸光度說(shuō)明如下：
A-2：

260 nm、320 nm、230 nm、280 nm下的吸光度分別代表了核酸、背景（溶液渾濁度）、鹽濃度和蛋白質(zhì)等有機(jī)物的吸光度值。OD260/OD280（R）體現(xiàn)了RNA中的蛋白質(zhì)等有機(jī)物的污染程度，質(zhì)量較好的RNA的R值應(yīng)在1.8～2.2之間，當(dāng)R<1.8時(shí)，溶液中的蛋白質(zhì)等有機(jī)物的污染比較明顯；當(dāng)R> 2.2時(shí)，說(shuō)明RNA已經(jīng)被水解成了單核苷酸。
在對(duì)核酸進(jìn)行吸光度檢測(cè)時(shí)，需要注意稀釋液應(yīng)使用TE Buffer。

Q-3：如何計(jì)算RNA的濃度?
A-3：

RNA濃度=（OD260-OD320）×稀釋倍數(shù)×0.04 μg/μl。

Q-4：Small RNA提取量較低怎么辦?
A-4：

① 向組織材料中加入RNAiso for Small RNA后，請(qǐng)充分研磨勻漿使其充分裂解。
② 相分離后請(qǐng)盡量完全回收上清液。
③ 增加起始組織加量，并成比例添加RNAiso for Small RNA。

Q-5：提取的Small RNA不溶怎么辦?
A-5：

① 75%乙醇清洗沉淀后不要干燥時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或加熱干燥。
② 可以于60℃加熱5分鐘后再于冰上溶解數(shù)小時(shí)。
③ RNA沉淀中含有不溶的蛋白質(zhì)混合物時(shí)，應(yīng)注意在相分離后吸取上清液時(shí)，避免槍頭接觸蛋白層。
④ 溶解液更換為0.5%的SDS溶液（DEPC處理水配制）。

Q-6：OD260/OD280值<1.65，為什么?
A-6：

① RNA應(yīng)使用TE Buffer稀釋后再進(jìn)行吸光度值的測(cè)定，低離子強(qiáng)度或低pH值會(huì)使OD280值升高。
② 樣品裂解時(shí)加入的RNAiso for Small RNA量偏少，造成蛋白質(zhì)變性不充分，可以再次對(duì)Small RNA溶液進(jìn)行苯酚/氯仿抽提，以除去蛋白質(zhì)。
③ 含有裂解液的樣品經(jīng)勻漿混勻后未在室溫靜置，或靜置的時(shí)間不足5分鐘。
④ 相分離后，吸取上清液時(shí)不小心接觸蛋白層造成污染。
⑤ RNA未充分溶解。

Q-7：提取的RNAiso for Small RNA降解，為什么?
A-7：

① 使用的組織材料不夠新鮮。提取RNA的組織材料應(yīng)采用新鮮的組織材料，或?qū)⑿迈r的組織材料用液氮迅速冷凍后置于-80℃保存。
② 提取RNA時(shí)使用的試劑及器材中混有RNA分解酶。
③ 提取的組織材料中含有大量的RNA分解酶，而RNAiso for Small RNA的添加量不夠。

Q-8：提取的RNA中含有DNA污染，為什么?
A-8：

① 裂解組織或細(xì)胞使用的RNAiso for Small RNA量偏少。
② 使用的組織材料中含有大量的有機(jī)溶劑（如：乙醇、異丙醇等）、高濃度的Buffer、堿性溶劑等。
③ 如果提取的RNA中含有DNA時(shí)，可以使用Recombinant DNase I（RNase-free）(Code No．2270A）進(jìn)行DNA消化。

頁(yè)面更新：2020-05-06 11:36:36