Small RNA Cloning Kit中的Control RNA是5′端磷酸化的21 mer RNA。使用此RNA進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)請(qǐng)確認(rèn)PCR產(chǎn)物是否正確（下圖：Lane 1，2的結(jié)果）。如果出現(xiàn)像Lane 3，4那樣二條帶的情況，通常是RNA的BAP處理不夠充分，這時(shí)需要對(duì)RNA重新進(jìn)行BAP處理。如果Control RNA實(shí)驗(yàn)沒(méi)有問(wèn)題，而在實(shí)際實(shí)驗(yàn)時(shí)出現(xiàn)自連情況，需增加使用Small RNA的量。
使用Control RNA時(shí)PCR產(chǎn)物電泳圖
Lane 1、2：Control RNA經(jīng)過(guò)BAP處理后結(jié)果
Lane 3、4：Control RNA未經(jīng)過(guò)BAP處理的結(jié)果
（由于RNA的5′端帶有磷酸基團(tuán)，RNA產(chǎn)生了自連）
M：20 bp DNA Ladder
為了提高反應(yīng)效率，Small RNA Cloning Kit中的T4 RNA Ligation Buffer中加入了PEG。PEG較粘稠，在Buffer吸取時(shí)要慢慢吸入，保證液體充分吸入Tip中（Tip吸入液體時(shí)，避免Tip尖端吸入氣泡）。加入Buffer時(shí)盡量不要起泡，并用槍吹吸10次左右保證Buffer充分混勻。 注意：根據(jù)末端堿基不同，T4 RNA Ligase的Ligation反應(yīng)效率會(huì)有所差別。
需要注意的事項(xiàng)有以下幾點(diǎn)：
1. 實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，Magnet Beads中的溶液去除后，應(yīng)立即加入下一步溶液，以防止Beads干燥影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
2. 電泳時(shí)DNA加樣量過(guò)多或電泳時(shí)間過(guò)短，會(huì)出現(xiàn)DNA條帶的拖尾現(xiàn)象。這時(shí)可以減少DNA的加樣量或使用大孔膠進(jìn)行電泳。此外，調(diào)小電壓減低電泳速度也可改善拖尾現(xiàn)象。
3. 切膠時(shí)注意不要切到目的片段下面的小片段（Adaptor之間的連接片段）。片段上下有拖尾現(xiàn)象時(shí)，不要切取拖尾部分的DNA。
頁(yè)面更新：2020-05-12 13:12:34
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