基因組DNA收量較低時,可以從以下幾個方面考慮:
1. 實驗材料量太少,適當增加材料起始量;
2. 裂解不充分,DNA未充分釋放,建議要延長裂解時間(過夜裂解)或增加裂解液的量;
3. 樣品質量不理想,提取的組織材料中基因組DNA含量較少,適當增加起始組織量;
4. 起始組織量過大,裂解困難,按比例適當增加裂解液的加量或分成多份進行提?。?br />
5. 洗脫時將滅菌水或Elution Buffer加熱至65℃后使用將有利于提高洗脫效率;
6. 請嚴格按照操作方法進行操作。
本試劑所提取DNA的完整性依賴于樣本類型、儲存時間以及固定條件。如果甲醛固定時間過長或樣本保存時間過久(>1年),可能會導致DNA完整性受損,如果目的片段較長時PCR擴增困難。
1. 實驗過程中沒有使用RNase A。應嚴格按照實驗操作要求使用RNase A。
2. RNase A可能失活。RNase A盡可能在-20℃下保存,RNase A活性比較穩(wěn)定,一般不易失活。
1. 提取的基因組DNA中鹽份濃度過高。在使用Buffer WA和Buffer WB進行DNA制備膜的清洗時,請沿Spin Column的管壁四周加入,且加入Buffer WB后室溫靜置5分鐘,有助于徹底清洗掉Column上殘留的鹽離子,這樣有利于提高清洗效果。
2. 洗脫液中殘留乙醇,在向Column中加入洗脫液之前,將Column在室溫下靜置2分鐘有助于使Column上殘留的乙醇徹底揮發(fā),然后再加入洗脫液洗脫。
3. 進行DNA洗脫時請一定在膜的中央加入洗脫液,盡量不要沾染Spin Column的管壁四周。
本試劑盒主要用于小量基因組DNA的制備,當實驗材料量超出說明書的要求用量時,可以加大Buffer GL或Buffer GB的用量,裂解后分到兩個Collection Tube中進行實驗操作。起始組織量最好控制在規(guī)定范圍內(nèi),可以分幾份進行,否則起始量過大會影響裂解和收量,如果裂解不充分會堵塞柱子,造成實驗失敗。
頁面更新:2019-04-25 14:05:49