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當(dāng)前位置：首頁 > 技術(shù)資料 > 相關(guān)問答 > Takara > 核酸提取純化及DNA標(biāo)記 > Yeast Processing Reagent (for total RNA preparation)

Q-1：提取的total RNA量少，為什么?

A-1：

提取的total RNA量少，可以從以下幾個(gè)方面考慮：
· 使用的酵母菌體量過多。
使用多于2～5×10⁷（使用Saccharomyces cerevisiae時(shí)）的酵母菌體時(shí)，Yeast Processing Enzyme Solution中含有的酶不能充分分解細(xì)胞壁，從而造成total RNA的提取量低。請(qǐng)使用適宜的酵母菌體量。依酵母（屬）不同能夠處理的適宜菌體數(shù)會(huì)有不同，此時(shí)請(qǐng)預(yù)先確認(rèn)適宜處理的菌體數(shù)量。
· 使用的酵母菌體量過少。
使用明顯少于2～5×10⁷（使用Saccharomyces cerevisiae時(shí)）的酵母菌體提取total RNA時(shí)，total RNA的收量和純度會(huì)降低。為了能夠以穩(wěn)定的回收率回收total RNA，請(qǐng)使用上述記錄的菌體量相近的菌體提取total RNA。依酵母（屬）不同能夠處理的適宜菌體數(shù)會(huì)有不同，此時(shí)請(qǐng)預(yù)先確認(rèn)適宜處理的菌體數(shù)量。
· 所使用的酵母菌不適合使用該制品提取total RNA。
本制品使用Yeast Processing Enzyme Solution中含有的酶分解酵母細(xì)胞壁。因此，如果將該制品用于難于分解細(xì)胞壁的酵母菌時(shí)，total RNA的提取量會(huì)顯著降低。
· total RNA的溶解不充分。
使用RNAiso Plus提取total RNA時(shí)，75％乙醇清洗后，如果過度干燥會(huì)使溶解變得困難。因此請(qǐng)注意不要加熱干燥或長(zhǎng)時(shí)間干燥。溶解困難時(shí)，可在60℃加熱5分鐘后于冰上放置數(shù)小時(shí)溶解。

Q-2：提取的total RNA有降解，怎么辦？

A-2：

· 依據(jù)使用的酵母（屬）或培養(yǎng)條件，使用樣品的狀態(tài)（處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的新鮮酵母菌體、長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)的酵母菌體、冷凍保存的酵母菌體pellet等）不同前處理的適宜時(shí)間不同。此時(shí)需要預(yù)先優(yōu)化處理時(shí)間。
· 以冷凍保存的酵母菌體pellet為樣品進(jìn)行提取時(shí)，由于冷凍狀態(tài)和保存時(shí)間不同，可能對(duì)total RNA的質(zhì)量及純度產(chǎn)生影響。此時(shí)，請(qǐng)準(zhǔn)備處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的新鮮酵母菌體，不推薦長(zhǎng)期冷凍保存的菌體。

Q-3：提取的total RNA 中混入基因組DNA，為什么？

A-3：

使用NucleoSpin RNA提取total RNA時(shí)，必須使用NucleoSpin RNA中添加Reaction Buffer for rDNase 和Reconstituted rDNase＊在Column上進(jìn)行DNase I處理。（＊參照NucleoSpin RNA的說明書進(jìn)行操作。）但是，即使是在Column上進(jìn)行DNase I 處理，由于被處理的酵母（屬）或培養(yǎng)條件，或被處理的酵母菌體是否過量及水相回收的情況等不同，可能依然會(huì)有基因組DNA混入。此種情況，請(qǐng)根據(jù)需要進(jìn)行DNase I處理，操作方法請(qǐng)參照說明書中Appendix內(nèi)容。

頁面更新：2019-04-26 16:24:29

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