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機(jī)構(gòu)用戶解決方案

Q-1：YPDA培養(yǎng)基與YPD培養(yǎng)基有什么區(qū)別？: A-1：
   YPD（Yeast Extract Peptone Dextrose Medium）培養(yǎng)基是酵母完全培養(yǎng)基，包含氨基酸、鹽、
   葡萄糖和其他營養(yǎng)物質(zhì)，有利于酵母快速生長。YPDA培養(yǎng)基是在YPD培養(yǎng)基中添加120 mg/L的硫
   酸腺嘌呤，可以防止含有ADE2突變等位基因的酵母菌株變成粉紅色或紅色。YPDA培養(yǎng)基中硫酸腺
   嘌呤的終濃度是標(biāo)準(zhǔn)配方（40 mg/L）中的3倍，如果你采用其他來源的培養(yǎng)基，Matchmaker酵母
   菌株可能會變成粉紅色或紅色。

Q-2：什么是SD培養(yǎng)基和dropout supplements（DO）？: A-2：
   SD（synthetically defined）培養(yǎng)基是用于S. cerevisiae常規(guī)培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基。
   Clontech提供的SD Base可以提供野生型酵母菌維持生存所需的基本物質(zhì)，包括氮源和碳源，但不
   包含突變菌株必需的氨基酸。將選擇性必需氨基酸添加到SD Base中可以配制特異的基本培養(yǎng)基，
   Clontech提供預(yù)混的選擇培養(yǎng)基Yeast Media Pouches和Yeast Media Sets。你也可以購買SD
   Base和選擇性氨基酸補充劑（DO），根據(jù)需要配制。特異的基本培養(yǎng)基用于選擇培養(yǎng)含有特異載體
   的酵母或雜交篩選。
   ● 例如，SD Base添加-Leu或-Trp DO Supplement用于篩選Matchmaker bait和prey載體。
      SD/-Leu/-Trp DDO，雙缺培養(yǎng)基，之所以這么叫是因為培養(yǎng)基中添加的必需氨基酸中缺失了
      亮氨酸和色氨酸。bait和prey載體帶有可以合成色氨酸和亮氨酸的基因，因此攜帶這兩個載體的
      酵母細(xì)胞可以在DDO上生長，而親代酵母菌株（如Y2H Gold）不含有這兩個基因。Clontech提
      供多種DO Supplement。

Q-3：什么是Aureobasidin A？如何用于Matchmaker Gold？: A-3：
   Aureobasidin A（AbA）是一種環(huán)狀縮肽抗生素，對S. cerevisiae具有毒性。Matchmaker Gold
   System是獨一無二的，因為該系統(tǒng)采用了AUR1-C基因作為全新的報告基因，這個基因可以產(chǎn)生
   Aureobasidin A（AbA）抗性。利用AbA這種高穩(wěn)定性的抗真菌縮肽，可以簡化酵母雙雜交文庫篩
   選，而無需像單獨采用營養(yǎng)篩選（如HIS3）一樣進(jìn)行優(yōu)化。

Q-4：可以采用X-Gal而不是X-a-Gal進(jìn)行Matchmaker System藍(lán)白斑篩選嗎？: A-4：
   不可以，X-Gal與X-a-Gal不同。X-Gal是E.coli β-半乳糖苷酶（lacZ）的反應(yīng)底物，而
   X-a-Gal是酵母α-半乳糖苷酶（Mel 1p）的反應(yīng)底物。X-a-Gal在Matchmaker Gold系統(tǒng)中
   用作藍(lán)白篩選的篩選標(biāo)記，在蛋白互作激活MEL1基因表達(dá)后，酵母細(xì)胞可以分泌表達(dá)Mel 1p。

Q-5：為什么酵母克隆在YPD培養(yǎng)基上培養(yǎng)有時會變成粉紅色或紅色？: A-5：
   ADE2或ADE1菌株在低含量腺嘌呤培養(yǎng)基上生長時表現(xiàn)出的紅色是嘌呤前體積累造成的。Clontech
   推薦所有的酵母菌株采用YPDA培養(yǎng)基培養(yǎng)，該培養(yǎng)基中添加了120 mg/L的硫酸腺嘌呤可以避免色
   素的積累。這些色素的特征不是很清楚，有一些化學(xué)分析在1967年發(fā)表^[1]。這些色素看起來在胞漿
   中積累^[2]，發(fā)射450-490 nm熒光。
   ● [1]. Smirnov, M. N. et al. (1967) Biochem. Biophys. Res. Comm. 27(3):299–304.
   ● [2]. Weisman, L.S. et al. (1987) J. Cell Biol. 105(4):1539–1547.

Q-6：固體培養(yǎng)基不凝固，是什么原因造成的？: A-6：
   瓊脂添加量正確的情況下（20 g/L），培養(yǎng)基不凝固可能是由于滅菌時間過長和pH值偏低造成的。
   部分地區(qū)的水質(zhì)偏酸，這種情況下，調(diào)整SD基本培養(yǎng)基的pH值至5.8，YPDA培養(yǎng)基的pH值至6.5，
   121℃，15min高壓滅菌。

Q-7：酵母細(xì)胞可以容忍幾次凍融過程？: A-7：
   一般來說，保存于25%甘油的酵母菌株在每次解凍后會丟失10%的活力細(xì)胞。因此，大多數(shù)凍存的
   酵母在融化溫度不超過室溫而且操作小心的條件下，最多可容忍10次凍融。有兩個例外情況請注
   意：預(yù)制的酵母文庫和酵母感受態(tài)細(xì)胞。為篩選到基因覆蓋度最廣的文庫，預(yù)制的酵母文庫一旦解
   凍，就必須立即使用且不要重新凍存。同樣，為得到最高轉(zhuǎn)化效率，酵母感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)該立即使用
   且避免凍存。

頁面更新：2015-01-14 13:10:02