Mate&Plate文庫是用于酵母雙雜交篩選的已經(jīng)將文庫轉化到MATα型單倍體酵母菌株(Y187)中的預分裝文庫。通過與表達bait的MATa型酵母雙雜報告菌株(Y2HGold和AH109)接合及涂板的方法即可篩選陽性克隆。實驗時只要將Y2HGold bait菌株采用SD/-Trp培養(yǎng)基過夜培養(yǎng)16-20小時使其OD600≥0.8,第二天將該菌液與滴度滿足要求的1管文庫混合,繼續(xù)過夜培養(yǎng)20-24小時使兩種酵母菌接合形成二倍體后將二倍體細胞涂布在SD/-Leu/-Trp/X-α-Gal/AbA的平板上篩選陽性互作克隆即可。
強烈推薦使用Make your Own“Mate & Plate” Library System(制品Code:630490)自己構建文庫。Mate&Plate方法是最簡單的酵母雙雜交文庫構建方法和最容易的篩選方法。
Clontech沒有驗證其他來源的酵母雙雜交文庫,但是,原則上任意文庫/prey載體在滿足以下條件
下,都可以用于Matchmker Gold:
· 兼容S. cerevisiae;
· 帶有GAL4轉錄激活域;
· 可以采用LEU2標記進行篩選。
頁面更新:2018-10-23 09:40:04