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機(jī)構(gòu)用戶解決方案

Q-1：酵母單雜交bait在設(shè)計(jì)上有什么要求？: A-1：
   在設(shè)計(jì)酵母單雜交bait時(shí)需要考慮兩點(diǎn)：順式作用元件（cis-acting element）和啟動(dòng)子序列。
   ①使用cis-acting元件：
    ■ 使用最少數(shù)量的cis-acting元件，cis-acting元件超過(guò)20bp時(shí)會(huì)增加非特異性結(jié)合。Clontech
       檢測(cè)的最長(zhǎng)的單拷貝cis-acting元件為20bp。
    ■ 如果你的cis-acting元件超過(guò)100bp，使用1個(gè)或2個(gè)拷貝。需要注意的是這么長(zhǎng)的片段會(huì)提高假
       陽(yáng)性。
   ②使用啟動(dòng)子序列：
    ■ bait中不要包含TATA box。
    ■ 拷貝數(shù)：如果啟動(dòng)子序列小于100 bp，使用2個(gè)拷貝作為bait。如果超過(guò)100 bp，使用1個(gè)拷貝
       作為bait。
    ■ 檢測(cè)假陽(yáng)性：構(gòu)建好bait菌株后，檢測(cè)報(bào)告基因的本底表達(dá)，以確認(rèn)任何非特異報(bào)告基因激活
       （參考操作手冊(cè)）。

Q-2：pAbAi空載體可以作為陰性對(duì)照使用嗎？: A-2：
   pAbAi空載的多克隆位點(diǎn)中Sma I和Xho I之間存在隱蔽的啟動(dòng)子，這個(gè)MCS可以被某些酵母體內(nèi)蛋白
   識(shí)別。如果這段識(shí)別序列是完整的，pAbAi載體會(huì)表現(xiàn)出自激活活性。因此，我們推薦退火后的核苷
   酸（插入片段）的3’端帶有Sal I了或Xho I酶切位點(diǎn)，而5’端可以是MCS中Sma I位點(diǎn)上游的任意的
   單一酶切位點(diǎn)。同時(shí)，推薦采用mutant bait做為陰性對(duì)照。

頁(yè)面更新：2015-01-14 11:19:11