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機(jī)構(gòu)用戶解決方案

產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

當(dāng)前位置：首頁 > 技術(shù)資料 > 相關(guān)問答 > Takara > cDNA合成 & 克隆 > RACE試劑盒
Q-1：使用3’RACE試劑盒時，RT-PCR反應(yīng)后，無PCR產(chǎn)物或出現(xiàn)Smear，怎么辦?
A-1：

首先請按說明書要求進(jìn)行Control反應(yīng)，如果Control反應(yīng)情況正常，那說明實(shí)驗(yàn)操作沒有問題。此時請從提取的RNA樣品的純度和添加量、基因的表達(dá)豐度、基因的長度和GC含量、引物的設(shè)計(jì)情況、參考文獻(xiàn)的可信度以及RT-PCR條件的設(shè)定等方面加以考慮；如果Control反應(yīng)不正常，應(yīng)從實(shí)驗(yàn)操作的準(zhǔn)確性以及實(shí)驗(yàn)器具處理等方面進(jìn)行考慮。

Q-2：使用3’RACE試劑盒時，RT反應(yīng)后的Outer PCR反應(yīng)體系中不加dNTP Mixture，為什么?
A-2：

在1×cDNA Dilution Buffer II和RT反應(yīng)液中均含有dNTP Mixture，可以足夠滿足PCR反應(yīng)的需要，所以不需再添加dNTP Mixture。

Q-3：使用3’RACE試劑盒時，3’RACE PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)電泳分析后，有時為什么不是單一條帶?
A-3：

不是單一條帶的可能原因如下：
1．可能是因?yàn)閙RNA不同的拼接方式造成的；
2．可能是因?yàn)槎喾NPoly(A)+位點(diǎn)的存在造成的；
3．可能是因?yàn)閿U(kuò)增的基因?yàn)槎嗷蚣易宓某蓡T；
4．可能是因?yàn)槲粗蛄行畔⒉磺宄?dǎo)致了非特異性擴(kuò)增。

Q-4：使用3’RACE試劑盒時，PCR反應(yīng)中，反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液的使用量多少較為合適?
A-4：

反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液的使用量可控制在0.5 μl～10 μl的范圍。

頁面更新：2020-04-26 14:46:31