電泳時(shí)的DNA分子量Marker和Agarose濃度的選擇如下圖： |
| DNA片段長(zhǎng)度 | Agarose濃度 |
使用Marker種類 |
| 200 bp以下 | 3%以上 |
фX174 Hae III digest DNA Marker
фX174 Hinc II digest DNA Marker DL500 DNA Marker DL1,000 DNA Marker DL2,000 DNA Marker QDL2,000 Quantitative DNA Marker 20 bp DNA Marker(Dye Plus) 50 bp DNA Marker(Dye Plus) 100 bp DNA Marker(Dye Plus) |
| 200 bp～700 bp | 2%～3% |
λ-BstP I digest DNA Marker
фX174 Hae III digest DNA Marker фX174 Hinc II digest DNA Marker DL500 DNA Marker DL1,000 DNA Marker DL2,000 DNA Marker QDL2,000 Quantitative DNA Marker DL5,000 DNA Marker pHY Marker 50 bp DNA Ladder(Dye Plus) 100 bp DNA Ladder(Dye Plus) 200 bp DNA Ladder(Dye Plus) 250 bp DNA Ladder(Dye Plus) 500 bp DNA Ladder(Dye Plus) |
| 700 bp～1,500 bp | 1%～2% |
λ-BstP I digest DNA Marker
λ-EcoT14 Idigest DNA Marker λ-EcoT14 I/Bgl II digest DNA Marker фX174 Hae III digest DNA Marker фX174 Hinc II digest DNA Marker DL2,000 DNA Marker QDL2,000 Quantitative DNA Marker DL5,000 DNA Marker DL10,000 DNA Marker pHY Marker Wide-Range DNA Ladder(50-10,000 bp) 50 bp DNA Ladder(Dye Plus) 100 bp DNA Ladder(Dye Plus) 200 bp DNA Ladder(Dye Plus) 250 bp DNA Ladder(Dye Plus) 500 bp DNA Ladder(Dye Plus) |
| 1,500 bp～5,000 bp | 0.7%～1% |
λ-BstP I digest DNA Marker
λ-EcoT14 I digest DNA Marker λ-EcoT14 I/Bgl II digest DNA Marker λ-Hind III digest DNA Marker DL5,000 DNA Marker DL10,000 DNA Marker DL15,000 DNA Marker pHY Marker Supercoiled DNA Ladder Marker Wide-Range DNA Ladder(50-10,000 bp) 200 bp DNA Ladder(Dye Plus) 250 bp DNA Ladder(Dye Plus) 500 bp DNA Ladder(Dye Plus) 1 Kb DNA Ladder(Dye Plus) |
| 5,000 bp以上 | 0.7%以下 |
λ-EcoT14 I digest DNA Marker
λ-EcoT14 I/Bgl II digest DNA Marker λ-Hind III digest DNA Marker DL10,000 DNA Marker DL15,000 DNA Marker Supercoiled DNA Ladder Marker Wide Range DNA Ladder(50-10,000 bp) 1 Kb DNA Ladder(Dye Plus) |
使用λDNA digest DNA Marker（λ-BstP I digest、λ-EcoT14 I digest、λ-EcoT14 I/Bgl II digest和λ-Hind III digest）時(shí)應(yīng)注意如下事項(xiàng)：
1. λDNA digest DNA Marker的原始末端之間經(jīng)常由COS末端結(jié)合在一起，在電泳前進(jìn)行熱處理（60℃，5分鐘），能使Marker的電泳圖像變得更為清晰。
以λ-EcoT14 I digest DNA Marker為例，原始末端之間的COS末端的結(jié)合，影響19,329 bp和4,254 bp的DNA條帶。如果電泳以后的圖像中的4,254 bp的DNA條帶亮度低于比其小的DNA片段時(shí)，那說明COS末端的結(jié)合情況比較嚴(yán)重。
2. 電泳時(shí)的加樣孔寬度小于6 mm時(shí)，每次取5 μl制品電泳便可得到清晰條帶。如果加樣孔增寬，須適當(dāng)增加Marker制品的加樣量。
3. 對(duì)DNA電泳而言，Agarose的純度對(duì)DNA條帶的清晰度影響很大。因此，電泳時(shí)應(yīng)盡量選用質(zhì)量好的Agarose。
使用DNA Marker時(shí)應(yīng)注意如下事項(xiàng)：
1. 電泳時(shí)的加樣孔寬度小于6 mm時(shí)，每次取5 μl制品電泳便可得到清晰條帶。如果加樣孔增寬，須適當(dāng)增加Marker制品的加樣量。
2. 對(duì)DNA電泳而言，Agarose的純度對(duì)DNA條帶的清晰度影響很大。因此，電泳時(shí)應(yīng)盡量選用質(zhì)量好的Agarose。
3. 進(jìn)行Agarose電泳時(shí)，Agarose的濃度與DNA片段的分離性能關(guān)系密切。Agarose濃度越大，對(duì)短片段DNA分離性能越好；反之，Agarose濃度越小，越有利于長(zhǎng)片段DNA的分離。
使用Supercoiled DNA Ladder Marker時(shí)應(yīng)注意如下事項(xiàng)：
1. 對(duì)DNA電泳而言，Agarose的純度對(duì)DNA條帶的清晰度影響很大，因此電泳時(shí)應(yīng)盡量選擇高質(zhì)量的Agarose。
2. 為達(dá)到較好的電泳效果，建議使用150 V穩(wěn)定電壓進(jìn)行電泳，并適當(dāng)延長(zhǎng)電泳時(shí)間。
頁(yè)面更新：2020-05-11 14:19:10
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