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機(jī)構(gòu)用戶解決方案

產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

Q-1：一般情況下組織或細(xì)胞中所能提取的DNA量如何?
A-1：

   一般情況下組織或細(xì)胞中所能提取的DNA量如下表：

組織材料 起始樣品量 基因組DNA提取量
肝臟 100 mg 300～400 μg
腎臟 100 mg 300～400 μg
腦 100 mg 200～300 μg
心臟 100 mg 200～300 μg
HL60培養(yǎng)細(xì)胞 1×107個(gè) 50～70 μg
植物葉片 1 g 20～200 μg
E.coli Cells 1×109個(gè) 30～40 μg
Q-2：DNA的吸光度代表什么?
A-2：

260 nm、320 nm、230 nm、280 nm下的吸光度分別代表了核酸、背景（溶液渾濁度）、鹽濃度和蛋白質(zhì)等有機(jī)物的吸光度值。OD260/OD280（R）體現(xiàn)了DNA中的蛋白質(zhì)等有機(jī)物的污染程度，質(zhì)量較好的DNA的R值應(yīng)在1.8～2.0之間，當(dāng)R<1.8時(shí)，溶液中的蛋白質(zhì)等有機(jī)物的污染比較明顯；當(dāng)R>2.2時(shí)，說明DNA已經(jīng)被水解成了單核苷酸。
在對(duì)核酸進(jìn)行吸光度檢測(cè)時(shí)，需要注意稀釋液應(yīng)使用TE Buffer。

Q-3：如何計(jì)算DNA的濃度?
A-3：

DNA濃度＝（OD260-OD320）×稀釋倍數(shù)×0.05 μg/μl。

Q-4：基因組DNA提取量較低怎么辦?
A-4：

可以參考如下建議進(jìn)行改進(jìn)：
1．向組織材料中加入DNAiso Reagent后，請(qǐng)充分研磨、勻漿，使其充分裂解。
2．組織材料中的DNA含量較少，提高起始材料使用量，本試劑不適用于微量組織材料DNA的提取。
3．增加DNAiso Reagent的添加量。

Q-5：提取的基因組DNA不溶怎么辦?
A-5：

可以參考如下建議進(jìn)行改進(jìn)：
1．75%乙醇清洗沉淀后不要干燥時(shí)間過長或加熱干燥。
2．基因組DNA在dH2O或TE Buffer中不易完全溶解，可以換成8 mM NaOH溶解。
3．當(dāng)基因組DNA的量過大時(shí)不易溶解，可以加長溶解時(shí)間或輕輕搖動(dòng)離心管以促進(jìn)溶解。

Q-6：OD260/OD280值<1.65，為什么?
A-6：

可能的原因如下：
1．DNA應(yīng)使用TE Buffer稀釋后再進(jìn)行吸光度值的測(cè)定，低離子強(qiáng)度或低pH值會(huì)使OD280值升高。
2．樣品裂解時(shí)加入的DNAiso Reagent量偏少，造成蛋白質(zhì)變性不充分，可以再次對(duì)DNA溶液進(jìn)行苯酚/氯仿抽提，以除去蛋白質(zhì)。
3．基因組DNA 未充分溶解。

Q-7：提取的基因組DNA降解，為什么?
A-7：

提取的基因組DNA可能降解的原因如下：
1．使用的組織材料不夠新鮮。提取基因組DNA的組織材料應(yīng)采用新鮮的組織材料，或?qū)⑿迈r的組織材料用液氮迅速冷凍后置于-80℃保存。
2．操作劇烈造成基因組DNA斷裂，破壞了基因組DNA的完整性。

Q-8：提取的基因組DNA中含有RNA污染，為什么?
A-8：

提取的基因組DNA中含有RNA污染，可能的原因如下：
1．組織材料或細(xì)胞裂解后未使用離心法除去RNA。
2．提取出的基因組DNA量較少時(shí)，采用離心法而未使用纏繞法收集基因組DNA沉淀，容易帶來RNA污染。
3．如果提取的基因組DNA中含有RNA時(shí)，可以對(duì)提取的基因組DNA進(jìn)行一次LiCl沉淀，以除去RNA污染，或者使用RNase進(jìn)行處理。

頁面更新：2020-04-28 16:02:23