本試劑盒可從新鮮的全血或凍存的全血(全血起始量不超過(guò)1 ml)中提取基因組DNA。從新鮮的全血材料中提取得到的DNA量較多,如從1 ml馬全血中提取獲得5 μg基因組DNA;從1 ml豬全血中提取獲得10 μg基因組DNA;從1 ml人全血中提取獲得5 μg基因組DNA;從5 μl的魚全血,純化得到了約12 μg的基因組DNA。但若使用凍存的、反復(fù)凍融的或長(zhǎng)時(shí)間保存的全血材料,DNA的收量將明顯減少。
基因組DNA收量較低時(shí),可以從以下幾個(gè)方面考慮:
1. 洗脫時(shí)將Elution Buffer或滅菌水加熱至65℃后使用將有利于提高洗脫效率;
2. 起始全血量較低或全血不夠新鮮(避免反復(fù)凍融),DNA已經(jīng)降解;
3. 請(qǐng)嚴(yán)格按照操作方法進(jìn)行操作。
1. 血液樣品不夠新鮮,已加入抗凝劑的血液樣品可在2~8℃保存10天;
2. 加入Buffer RCL后,放置太長(zhǎng)時(shí)間會(huì)導(dǎo)致提取的基因組DNA降解,應(yīng)嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)步驟操作。
3. 紅細(xì)胞裂解不充分,若加入Buffer RCL裂解紅細(xì)胞后,離心收集的沉淀中仍殘留明顯的紅色沉淀,應(yīng)重復(fù)使用Buffer RCL進(jìn)行裂解。
1. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中沒(méi)有使用RNase A。應(yīng)嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)操作要求使用RNase A。
2. RNase A可能失活。RNase A盡可能在-20℃下保存。
1. 提取的基因組DNA中鹽份濃度過(guò)高。在使用Buffer WA和Buffer WB進(jìn)行DNA制備膜的清時(shí),請(qǐng)沿Spin Column的管壁四周加入,且加入Buffer WB后室溫靜置5分鐘,有助于徹底清洗掉Spin Column上殘留的鹽離子,這樣有利于提高清洗效果。
2. 洗脫液中殘留乙醇,在向Spin Column中加入洗脫液之前,將Spin Column在室溫下靜置2分鐘有助于使Spin Column上殘留的乙醇徹底揮發(fā),然后再加入洗脫液洗脫。
3. 進(jìn)行DNA洗脫時(shí)請(qǐng)一定在膜的中央加入洗脫液,盡量不要沾染Spin Column的管壁四周。
全血經(jīng)過(guò)凍存后會(huì)使大部分的紅細(xì)胞和部分白細(xì)胞破裂。由于DNA主要存在于白細(xì)胞中,所以通常情況下凍存全血的DNA提取量會(huì)減少20%~50%。
頁(yè)面更新:2019-04-25 11:13:38