基因組DNA收量較低時(shí),可以從以下幾個(gè)方面考慮:
1. 實(shí)驗(yàn)材料量太少,適當(dāng)增加材料起始量;
2. 裂解不充分,DNA未充分釋放,建議要延長(zhǎng)裂解時(shí)間(過(guò)夜裂解)或增加裂解液的量;
3. 樣品質(zhì)量不理想,提取的組織材料中基因組DNA含量較少,適當(dāng)增加起始組織量;
4. 起始組織量過(guò)大,裂解困難,按比例適當(dāng)增加裂解液的加量或分成多份進(jìn)行提取;
5. 洗脫時(shí)將滅菌水或Elution Buffer加熱至65℃后使用將有利于提高洗脫效率;
6. 請(qǐng)嚴(yán)格按照操作方法進(jìn)行操作。
本試劑所提取DNA的完整性依賴于樣本類型、儲(chǔ)存時(shí)間以及固定條件。如果甲醛固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或樣本保存時(shí)間過(guò)久(>1年),可能會(huì)導(dǎo)致DNA完整性受損,如果目的片段較長(zhǎng)時(shí)PCR擴(kuò)增困難。
1. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中沒(méi)有使用RNase A。應(yīng)嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)操作要求使用RNase A。
2. RNase A可能失活。RNase A盡可能在-20℃下保存,RNase A活性比較穩(wěn)定,一般不易失活。
1. 提取的基因組DNA中鹽份濃度過(guò)高。在使用Buffer WA和Buffer WB進(jìn)行DNA制備膜的清洗時(shí),請(qǐng)沿Spin Column的管壁四周加入,且加入Buffer WB后室溫靜置5分鐘,有助于徹底清洗掉Column上殘留的鹽離子,這樣有利于提高清洗效果。
2. 洗脫液中殘留乙醇,在向Column中加入洗脫液之前,將Column在室溫下靜置2分鐘有助于使Column上殘留的乙醇徹底揮發(fā),然后再加入洗脫液洗脫。
3. 進(jìn)行DNA洗脫時(shí)請(qǐng)一定在膜的中央加入洗脫液,盡量不要沾染Spin Column的管壁四周。
本試劑盒主要用于小量基因組DNA的制備,當(dāng)實(shí)驗(yàn)材料量超出說(shuō)明書(shū)的要求用量時(shí),可以加大Buffer GL或Buffer GB的用量,裂解后分到兩個(gè)Collection Tube中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。起始組織量最好控制在規(guī)定范圍內(nèi),可以分幾份進(jìn)行,否則起始量過(guò)大會(huì)影響裂解和收量,如果裂解不充分會(huì)堵塞柱子,造成實(shí)驗(yàn)失敗。
頁(yè)面更新:2019-04-25 14:05:49