新冠病毒來襲，蛋白質(zhì)互作研究了解一下 |
| 新型冠狀病毒仍在全球肆虐，而國內(nèi)目前已經(jīng)到了復產(chǎn)復工的階段。這次的疫情讓人們意識到，雖然人類的科技在近百年來飛速發(fā)展，但在大自然的面前人類依然十分渺小。對于科研學者來說，需要盡可能多地去了解這些大自然中的微小生物，這樣將來面對類似危機的時候就可以更加快速地找出應對方法。 |
 |
| 那么，蛋白質(zhì)互作和病毒研究又有什么關系？ 我們都知道這次新型冠狀病毒其實就是由蛋白質(zhì)和RNA構(gòu)成的，冠狀病毒自身不具備繁殖能力，需要依靠宿主才能完成病毒的復制。因此，搞清楚病毒-宿主蛋白質(zhì)相互作用關系有助于解析病毒的入侵機制，這對于疫情退治、尋找特效藥物是十分有效的！ 下面我們主要介紹酵母雙雜交技術。它是一種實驗室常用的經(jīng)典蛋白質(zhì)互作研究方法。真核模式生物酵母的起始轉(zhuǎn)錄，是需要轉(zhuǎn)錄因子參與調(diào)控的。學者發(fā)現(xiàn)酵母的轉(zhuǎn)錄因子GAL4含有兩個結(jié)構(gòu)域，分別是DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（DNA-BD）和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域（AD），這兩個結(jié)構(gòu)域分開時，仍分別具有功能但不能激活轉(zhuǎn)錄，只有二者非常接近時才能形成完整的轉(zhuǎn)錄因子GAL4從而激活轉(zhuǎn)錄。 基于這個發(fā)現(xiàn)，科研學者將一個已知蛋白質(zhì)與DNA-BD結(jié)合結(jié)構(gòu)域融合表達，并稱之為誘餌蛋白質(zhì)（bait），將另一種蛋白質(zhì)與AD激活域融合表達，將它稱之為獵物蛋白質(zhì)（prey）。如果兩個蛋白質(zhì)之間有相互作用，就會形成完整的轉(zhuǎn)錄因子GAL4，從而激活效應基因表達。 |
 |
| 如果我們選擇藍白斑篩選基因、抗生素抗性基因這類報告基因作為效應基因的話，就可以通過酵母菌是否變藍、是否有抗生素抗性來判斷蛋白質(zhì)相互作用有沒有發(fā)生。 |
 |
| 原理和應用說完了，相信大家一定有一個疑惑，哪里有合適的載體來表達誘餌蛋白質(zhì)和獵物蛋白質(zhì)？哪里又有含有合適報告基因的酵母菌工程菌株呢？請往下看！ |
| Matchmaker® Gold Yeast Two-Hybrid System |
| 選擇Takara公司的Matchmaker® Gold酵母雙雜交系統(tǒng)，該系統(tǒng)含有全部的酵母雙雜交實驗所用到的工程菌株和質(zhì)粒，并且系統(tǒng)使用了4種報告基因共同作用，有效降低了酵母雙雜交方法假陽性發(fā)生的概率。整套試劑除了必要用到的菌株和質(zhì)粒外，還附帶了一套酵母轉(zhuǎn)化試劑盒，助您輕松完成酵母菌轉(zhuǎn)化實驗，只要購買Matchmaker® Gold Yeast Two-Hybrid System，就可以嘗試去尋找與您感興趣的蛋白質(zhì)具有相互作用的蛋白質(zhì)啦。 |
| 點擊瀏覽詳細信息 |
 |
| 有的小伙伴們又要問了，酵母雙雜交技術是如何應用于病毒相關研究中呢？ |
| 舉例來說，如果我們以病毒的某種蛋白質(zhì)和DNA-BD結(jié)構(gòu)域融合表達作為誘餌蛋白質(zhì)，再從宿主細胞中提取RNA構(gòu)建文庫，通過酵母雙雜交方法我們就可以篩選出究竟是哪個宿主蛋白質(zhì)和病毒的蛋白質(zhì)有相互作用，后續(xù)就能以此為依據(jù)解析病毒入侵的機制，甚至可以嘗試加入藥物來抑制蛋白質(zhì)互作關系，從而找出對抗病毒入侵的特效藥物。 |
| 接下來向大家介紹幾篇酵母雜交技術應用于病毒蛋白質(zhì)與宿主蛋白質(zhì)互作研究的文獻，先來看第一篇： |
| Chen Y , Cai H , Pan J , et al. Functional screen reveals SARS coronavirus nonstructural protein nsp14 as a novel cap N7 methyltransferase[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2009, 106(9):3484-3489. |
| 這篇文章作者主要的研究目標是SARS冠狀病毒 (SARS-CoV)，作者采用酵母雙雜交的方法，以SARS冠狀病毒的spike (S) 蛋白質(zhì)作為誘餌蛋白質(zhì)，從HeLa細胞構(gòu)建的cDNA文庫進行互作蛋白質(zhì)篩選，發(fā)現(xiàn)真核起始因子eIF3的一個亞基eIF3f可能與SARS-CoV spike (S) 蛋白質(zhì)的N端區(qū)域具有相互作用。后續(xù)又通過免疫共沉淀及熒光免疫檢測法進一步確認蛋白質(zhì)互作。通過實驗分析表明，冠狀病毒S蛋白質(zhì)和eIF3f之間的相互作用在控制宿主基因的表達方面起到抑制作用，揭示了SARS病毒發(fā)病的新機制。 |
| 針對人類有害的病毒值得重視，但對家畜有害的病毒同樣不容小覷, 下面這篇文章和非洲豬瘟病毒相關，同樣采用了酵母雙雜交的方法進行研究： |
| Rivera J , Abrams C , Hernaez B , et al. The MyD116 African Swine Fever Virus Homologue Interacts with the Catalytic Subunit of Protein Phosphatase 1 and Activates Its Phosphatase Activity[J]. Journal of Virology, 2007, 81(6):2923-2929. |
| 作者通過酵母雙雜交的方法發(fā)現(xiàn)蛋白磷酸酶1 (PP1)與非洲豬瘟病毒的DP71L蛋白質(zhì)具有特異性相互作用。通過檢測感染了病毒的Vero細胞中PP1和PP2A的水平，研究了這種相互作用的功能和效應。 |
| 當然，酵母雙雜技術不僅僅限于病毒-宿主蛋白質(zhì)的互作研究，它同樣可以用于病原微生物-宿主蛋白質(zhì)互作、原生動物-宿主蛋白質(zhì)互作： |
| 沙眼衣原體相關：Hower S , Wolf K , Fields K A . Evidence that CT694 is a novel Chlamydia trachomatis T3S substrate capable of functioning during invasion or early cycle development[J]. Molecular Microbiology, 2009, 72(6):1423-1437. |
| 弓形蟲相關：Liu Q , Li F C , Elsheikha H M , et al. Identification of host proteins interacting with Toxoplasma gondii GRA15 (TgGRA15) by yeast two-hybrid system[J]. Parasites & Vectors, 2017, 10(1):1. |
| 以上幾篇文章的作者在使用酵母雜交方法進行研究時，都使用了Matchmaker® Gold酵母雙雜交系統(tǒng)。通過這些文章我們可以看出酵母雜交技術有著廣泛的應用，而Matchmaker® Gold系列產(chǎn)品更是您酵母雙雜交研究的理想工具。 |
| 追趕實驗進度？點擊酵母雜交實驗快速工具集錦，提高實驗效率！ |
| 趕快使用Matchmaker® Gold酵母雙雜系統(tǒng)一展拳腳吧！ |
 |
頁面更新：2020-07-01 08:20:19
|
使用規(guī)章丨聯(lián)系方式丨 關于個人信息的保護丨特別說明
寶日醫(yī)生物技術（北京）有限公司
Copyright ? 2015 Takara Biomedical Technology (Beijing) Co., Ltd. All rights reserved. 京ICP備06030419號-1
京公網(wǎng)安備 110114000405號
