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Takara來(lái)支招，如何確定慢病毒/逆轉(zhuǎn)錄病毒前病毒整合位點(diǎn)！

慢病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒載體在生命科學(xué)研究領(lǐng)域，作為向目標(biāo)細(xì)胞導(dǎo)入外源基因的有力工具而得到廣泛應(yīng)用。通過(guò)它們的復(fù)制生命周期會(huì)將慢病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒RNA基因組的一個(gè)DNA拷貝整合到宿主基因組中。利用這一特點(diǎn)，可以實(shí)現(xiàn)外源基因在目標(biāo)細(xì)胞中的持續(xù)穩(wěn)定表達(dá)。

而整合位點(diǎn)位置對(duì)轉(zhuǎn)基因的表達(dá)和宿主細(xì)胞的表現(xiàn)型都有重要影響，甚至可能會(huì)導(dǎo)致關(guān)鍵基因突變或者激活原癌基因，進(jìn)而導(dǎo)致發(fā)生惡性腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)增加。在2021年2月國(guó)家發(fā)布試行的《基因修飾細(xì)胞治療產(chǎn)品非臨床研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則》中，描述了基于臨床安全性考慮需要對(duì)一些整合性載體，包括如慢病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒，所可能帶來(lái)的插入突變風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估。

成熟的整合位點(diǎn)分析技術(shù)。

Takara可分別提供適用于慢病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒前病毒整合位點(diǎn)分析試劑盒，使用基因組步移技術(shù)獲取慢病毒/逆轉(zhuǎn)錄病毒前病毒在轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞基因組中的整合位點(diǎn)片段，后續(xù)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序和分析，可以確認(rèn)整合位點(diǎn)所處的染色體位置。

產(chǎn)品名稱(chēng)	Code No.	適用病毒類(lèi)型
Lenti-X^™ Integration Site Analysis Kit	631263	慢病毒
Retro-X^™ Integration Site Analysis Kit	631467	逆轉(zhuǎn)錄病毒

我們來(lái)看一下HT1080細(xì)胞克隆中慢病毒整合位點(diǎn)的分析結(jié)果。

提取慢病毒整合后的HT1080細(xì)胞基因組DNA，使用DraI、SspI、HpaI這3種不同的平末端切割限制酶酶切消化基因組DNA并連接接頭，構(gòu)建出3個(gè)病毒整合文庫(kù)。這3個(gè)病毒整合文庫(kù)經(jīng)過(guò)兩輪PCR擴(kuò)增后，對(duì)獲得的5個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行純化，并分別使用試劑盒中包含的AP2和LSP2接頭引物測(cè)序和BLAST軟件分析。分析結(jié)果顯示，其中4個(gè)PCR產(chǎn)物對(duì)應(yīng)的整合位點(diǎn)為染色體12q22。染色體12q22上的病毒整合位點(diǎn)位于NR2C1基因的內(nèi)含子內(nèi)。

了解詳情：

Lenti-X^™ Integration Site Analysis Kit

Retro-X^™ Integration Site Analysis Kit

T細(xì)胞治療研究解決方案

Takara可以為T細(xì)胞改造和培養(yǎng)提供較為完善的解決方案，助力T細(xì)胞治療研究。

增強(qiáng)慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)，促進(jìn)增殖
RetroNectin GMP級(jí)試劑

慢病毒4小時(shí)滴度測(cè)定
Lenti-X p24 Rapid Titer Kit

人細(xì)胞因子10分鐘定量
IFN-γ/IL-2/TNF-α GoStix Plus

頁(yè)面更新：2021-07-30 10:01:47

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