|
|
|
酵母雜交系統(tǒng)是利用酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4的特性來進行蛋白質(zhì)相互作用分析的系統(tǒng)。 在酵母雙雜交系統(tǒng)中，GAL4 DNA -BD （DNA 結(jié)合域）與bait（誘餌）融合表達，GAL4 AD （轉(zhuǎn)錄激活域）與prey（獵物：文庫)）融合表達。bait和prey之間的相互作用可以使GAL4重新具有轉(zhuǎn)錄活性，從而可以激活下游報告基因的表達。利用選擇培養(yǎng)基進行篩選即可獲得具有報告基因活性的克隆，從而分析蛋白質(zhì)之間的相互作用。在酵母單雜交系統(tǒng)中，GAL4 AD與prey蛋白質(zhì)融合表達，prey與bait DNA序列（目的DNA序列）之間的相互作用可以激活下游報告基因的表達，從而使宿主酵母可以在缺陷培養(yǎng)基上生長。 而轉(zhuǎn)化，無疑是實驗中至關重要的一步，只有成功轉(zhuǎn)化才能繼續(xù)進行接下來的相關基因表達以及互作。 |
| 今天來介紹一下實驗中“有大用”的酵母轉(zhuǎn)化試劑盒! |
 |
| 酵母轉(zhuǎn)化試劑盒Yeastmaker Yeast Transformation System 2 （Code No. 630439） |
| 本試劑盒采用聚乙二醇（PEG）/醋酸鋰方法高效制備并轉(zhuǎn)化酵母感受態(tài)菌株，適用于小規(guī)?；蛭膸旒墑e的高效酵母轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化效率為3 × 105轉(zhuǎn)化子/μg質(zhì)粒DNA。 |
| 兩大優(yōu)點，提高轉(zhuǎn)化效率！ |
| ♦ 采用“YPD Plus”復蘇培養(yǎng)基，使更多的克隆子得以存活，為轉(zhuǎn)化過程提供了更加高效、可靠的方法。 ♦ 優(yōu)化的Yeastmaker Carrier DNA（鮭魚精子DNA）有助于質(zhì)粒DNA的吸收。 |
| 海量應用案例，助力每一次酵母轉(zhuǎn)化實驗： |
| 1、酵母雙雜交系統(tǒng)，構(gòu)建bait/prey蛋白質(zhì)，用于研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)的相互作用。 Qu, Y., Wang, X., et al. (2021). ORF3a-Mediated Incomplete Autophagy Facilitates Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus-2 Replication. Frontiers in cell and developmental biology, 9, 716208. 通過篩選SARS-CoV-2（嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒-2，2019年冠狀病毒病（新冠肺炎）大流行的病原體）的26種病毒蛋白，證明僅ORF3a的表達足以誘導不完全自噬。 以SARS-CoV-2 ORF3a作為誘餌蛋白質(zhì)進行酵母雙雜交篩選（使用Yeastmaker Yeast Transformation System 2將誘餌蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化至酵母菌株Y187），發(fā)現(xiàn)了 UVRAG與SARS-CoV-2 ORF3a的新的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，UVRAG是激活PI3KC3復合物以促進自噬體成熟并抑制人類結(jié)腸癌細胞增殖的關鍵自噬調(diào)節(jié)劑。通過SARS-CoV-2 ORF3a與自噬調(diào)節(jié)因子UVRAG相互作用，進一步研究ORF3a宿主自噬機制以及促進SARS-CoV-2復制的機制。 |
| 2、重組酵母菌株，用于研究重組酵母菌株相關性能 Suzuki, T., Hoshino, T. et al. (2019). High-temperature ethanol production by a series of recombinant xylose-fermenting Kluyveromyces marxianus strains. Enzyme and microbial technology, 129, 109359. 通過構(gòu)建了兩個重組馬克思克魯維菌株DMB5和DMB13，用于研究表達木糖還原酶（XR）、NAD+或NADP+依賴性木糖醇脫氫酶（XDH）和木糖醇激酶（XK）。使用Yeastmaker Yeast Transformation System 2對質(zhì)粒pGK406-XDHXKXR和pGK606-mXDHXXXR進行酵母轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化為馬克思克魯維酵母酵母DMB2-108，并稍加修改。用EcoRV消化基于pGK406的質(zhì)粒（pGK406 XDHXXKXR和pGK406 mXDHXXR），然后用于轉(zhuǎn)化到DMB2-108中，分別構(gòu)建重組菌株DMB5和DMB13。質(zhì)粒pGK406用EcoR V消化，然后轉(zhuǎn)化到DMB2-108中以構(gòu)建DMB4（對照菌株）。將這些菌株與先前報道的表達木糖發(fā)酵酵母（Scheffersomyces stipitis）XR和NAD+依賴性XDH以及釀酒酵母XK的菌株DMB3-7進行比較，以評估30°C和40°C下的酶活性和乙醇生產(chǎn)率。 |
| 3、構(gòu)建酵母載體，進行酵母表達研究 a) Thimmappa, R., Wang, S.,et al. (2022). Biosynthesis of saponin defensive compounds in sea cucumbers. Nature chemical biology, 18(7), 774–781. 釀酒酵母是功能分析基因的模式生物，酵母系統(tǒng)已被廣泛用于確認幾種植物中脂肪酸去飽和酶的預測活性。將空pYES2載體轉(zhuǎn)化的酵母細胞用作對照；酵母表達載體pYES2被用于獨立克隆BnaFAD2-A5和BnaFAE1-A8基因，將兩個構(gòu)建體分別轉(zhuǎn)化（使用Yeastmaker Yeast Transformation System 2）到釀酒酵母（INVSc1）中，并在酵母中表達它們以評估其功能。 b) Zafar, S., Tang, M. et al. (2020). Candidate genes-association study to identify loci related to oleic acid in Brassica napus using SNP markers and their heterologous expression in yeast. Plant physiology and biochemistry : PPB, 146, 294–302. 通過整合DNA技術，將紫球海膽（S.purpuratus）LSS、仿刺參(A.japonicus)的OSC1a、OSC2a、OSC1b和OSC2b編碼序列合成為gBlocks。然后在酵母中通過同源重組方式重組gBlocks以獲得全長基因。在酵母菌株Gil77（gal2 hem3-6 erg7 ura3-167）中進行所有酵母同源重組和表達分析。使用引物通過PCR擴增gBlocks。然后將擴增的gBlocks與用Xba I和Hind III線性化的pYES2載體一起共轉(zhuǎn)化為Gil77。使用Yeastmaker Yeast Transformation System 2進行酵母轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化使pYES2載體和gBlock OSC片段之間的體內(nèi)重組，從而產(chǎn)生全長表達構(gòu)建體。從酵母中回收質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌（DH5α）中，通過測序驗證其序列并進行后續(xù)酵母表達相關研究。 |
| 多種關聯(lián)好物，強烈推薦！ |
| ♦ Matchmaker Gold酵母雙雜交系統(tǒng)是深受歡迎的Matchmaker產(chǎn)品線中研究蛋白質(zhì)—蛋白質(zhì)相互作用的一款產(chǎn)品。系統(tǒng)中包含新的Y2HGold酵母菌株、更加嚴密的篩選報告基因、簡單易用的文庫、高水平表達的載體以及基于SMART技術的文庫構(gòu)建試劑盒。 ♦ Matchmaker Gold酵母單雜交（Y1H）文庫篩選系統(tǒng)為鑒定蛋白質(zhì)-DNA相互作用提供了簡便高效的方法。所有的Matchmaker Gold系統(tǒng)均采用篩選強度較高的Aureobasidin A（AbAr）抗生素報告基因。這種新型的報告子可以高效殺死非抗性克隆，從而大大降低了背景克隆的生長。 ♦ Make Your Own Mate & Plate Library System可以用于自制文庫。利用該系統(tǒng)，一周之內(nèi)即可構(gòu)建足夠用于數(shù)百次酵母雙雜交篩選實驗的所需文庫。文庫構(gòu)建是在Y187文庫酵母菌株中通過酵母高效的同源重組機制直接完成的，無需進行傳統(tǒng)文庫構(gòu)建過程中的一些繁冗的操作 (比如文庫克隆、擴增和大腸桿菌收集等)。 ♦ Normalized Mate and Plate Libraries是高度復雜的cDNA文庫，文庫克隆到GAL4 AD載體上并轉(zhuǎn)化到酵母菌株Y187中。因為文庫擴增和酵母轉(zhuǎn)化操作已經(jīng)完成，所以使用這些文庫進行雙雜交篩選更加省時省力。均一化處理降低了文庫中高豐度的轉(zhuǎn)錄本，低豐度及稀少的cDNA得以富集，這樣的文庫更加具有基因代表性，也使篩選操作更加簡單，并大大降低了在篩選文庫時獲得假陽性的可能性。 |
| Takara Bio三十周年促銷季仍在繼續(xù)！酵母雜交產(chǎn)品價格低至五折！ 更多促銷詳情歡迎您點擊鏈接查看！ 最后！千萬記得掃描下方的二維碼，參與打卡情人節(jié)企劃！ 打卡十二期另外有浪漫禮品哦! |
 |
頁面更新：2023-10-18 11:46:17
|
使用規(guī)章丨聯(lián)系方式丨 關于個人信息的保護丨特別說明
寶日醫(yī)生物技術（北京）有限公司
Copyright ? 2015 Takara Biomedical Technology (Beijing) Co., Ltd. All rights reserved. 京ICP備06030419號-1
京公網(wǎng)安備 110114000405號
