| 使用簡便、備受好評的腺病毒基因?qū)胂到y(tǒng)推薦 | ||||||||||||
| 腺病毒基因轉(zhuǎn)移是將基因?qū)氩溉閯?dòng)物細(xì)胞的最可靠方法之一，已經(jīng)在基因治療、新冠疫苗、流感疫苗研發(fā)中有所應(yīng)用。因?yàn)橄俨《镜母腥静皇羌?xì)胞周期依賴性的，你可以將你的基因傳遞到原代和轉(zhuǎn)化的細(xì)胞系。腺病毒是哺乳動(dòng)物細(xì)胞中蛋白質(zhì)生產(chǎn)的理想工具，因?yàn)樵诟腥竞?，靶基因?huì)以非常高的水平瞬時(shí)表達(dá)，因?yàn)樵S多細(xì)胞都會(huì)接受重組基因組的多個(gè)拷貝。此外，腺病毒能夠感染來自許多不同動(dòng)物物種的各種增殖和靜止細(xì)胞類型，包括人類、非人靈長類動(dòng)物、豬、嚙齒動(dòng)物 、小鼠和兔子。 |
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| Takara腺病毒基因?qū)胂到y(tǒng)，使用快速簡便、備受好評。 |
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| 強(qiáng)大的腺病毒載體系統(tǒng)，省去穿梭質(zhì)粒更快捷 |
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| 使用強(qiáng)大克隆技術(shù)，省去穿梭質(zhì)粒，簡化了重組腺病毒載體克隆步驟，加快了克隆速度。本系統(tǒng)基于人源5型腺病毒（Ad5）改造而成。由于腺病毒載體較大（～34 kb），克隆難度較高，目前大多數(shù)腺病毒載體系統(tǒng)需要借助穿梭質(zhì)粒，使用復(fù)雜的克隆程序來克服克隆困難這一問題。Adeno-X Adenoviral System 3利用強(qiáng)大的In-Fusion HD克隆技術(shù)，不需要借助穿梭質(zhì)粒就可以將目的基因直接克隆至腺病毒載體中，就像常規(guī)質(zhì)粒構(gòu)建一樣簡單快速。重要的是，將其它系統(tǒng)至少8天的克隆時(shí)間縮短至2-3天，同時(shí)確?？寺⌒?90%。
另外，也可以提供四環(huán)素誘導(dǎo)表達(dá)型、無啟動(dòng)子通用型等重組腺病毒載體系統(tǒng)，適用于多種研究需求。
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| 腺病毒滴度測定多樣方案，適應(yīng)不同場景下多重選擇 |
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| ♦ 簡便準(zhǔn)確的酶聯(lián)免疫分析法 | ||||||||||||
| 這是一種功能滴度測定方法，基于腺病毒六鄰體蛋白質(zhì)進(jìn)行測定。Adeno-X Rapid Titer Kit這款試劑盒中包含一種六鄰體蛋白質(zhì)特異性抗體，用于標(biāo)記感染細(xì)胞。六鄰體蛋白質(zhì)由腺病毒基因組編碼，是腺病毒衣殼的重要組成部分，為腺病毒復(fù)制所需要，但是它的表達(dá)需要依賴于E1基因產(chǎn)物。因此，像HEK 293這樣的E1基因反式互補(bǔ)細(xì)胞類型，可以用來測定腺病毒感染活性，原因是只有細(xì)胞被感染才能表達(dá)六鄰體蛋白質(zhì)。這種快速測定方法需要先花費(fèi)1-2小時(shí)建立體系，兩天后再花費(fèi)大約3小時(shí)對細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記、染色和計(jì)數(shù)。每個(gè)染色細(xì)胞對應(yīng)一個(gè)感染單位。這種檢測方法可與1型、2型、5型和6型人腺病毒相兼容。 我們已經(jīng)對基于5型人腺病毒的Adeno-X病毒進(jìn)行了驗(yàn)證，Adeno-X病毒由Takara Adeno-X腺病毒載體系統(tǒng)所制備。 |
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| ♦ 易用高效的熒光定量PCR法 | ||||||||||||
| 這是一種使用定量PCR技術(shù)測定腺病毒滴度的方法，快速、簡單、高效。Adeno-X qPCR Titration Kit可以用于檢測所有Ad5-based腺病毒載體，當(dāng)然也可以檢測使用Takara Adeno-X腺病毒載體系統(tǒng)所制備的重組腺病毒。結(jié)合使用了qPCR和TB Green chemistry，這樣就可以依據(jù)校準(zhǔn)的DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線來確定腺病毒制劑（如粗裂解液或純化病毒粒子）中的病毒基因組拷貝數(shù)。這種測定方法只需要大約4小時(shí)就可得出檢測結(jié)果，而由于qPCR滴定花費(fèi)時(shí)間短，所以實(shí)驗(yàn)人員在收獲病毒的同一天，就可以使用經(jīng)過準(zhǔn)確滴定的病毒去感染目標(biāo)細(xì)胞。 |
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| ♦ 方便快速的GoStix檢測法 | ||||||||||||
| 這是一種即時(shí)靈敏 (～10 min)的腺病毒滴度測定方法，讓您可以迅速判斷出腺病毒是否制備完畢以做好使用準(zhǔn)備，也是確定擴(kuò)增后收獲病毒最佳時(shí)間的理想選擇。Adeno-X GoStix只需要將20 μl培養(yǎng)液上清添加至GoStix檢測板上樣孔中，隨后滴加4滴緩沖液，等待2-20分鐘，檢測板上的檢測窗口會(huì)出現(xiàn)一條帶。在上清液中檢測到的腺病毒數(shù)量與細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的腺病毒是密切相關(guān)的。每次測試都可以保證足夠高的靈敏度，使用少量病毒上清液就可以進(jìn)行檢測，也可以用于確保在腺病毒擴(kuò)增過程中獲得盡可能大的病毒收量（我們使用這些檢測板來確定從感染細(xì)胞中收獲病毒的最佳時(shí)間）。感染HEK293細(xì)胞后，每天只需要取20 μl上清液進(jìn)行檢測。檢測窗口出現(xiàn)一條顏色很深的Test條帶，可以確保在產(chǎn)毒高峰時(shí)期收獲高滴度的腺病毒。 |
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| 腺病毒滴度測定多樣方案，適應(yīng)不同場景下多重選擇 |
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| 想要簡便快速地純化腺病毒，可以選擇基于色譜的腺病毒純化系統(tǒng)。Takara開發(fā)的這種基于色譜的腺病毒純化方法，可以在1.5小時(shí)內(nèi)從感染細(xì)胞中純化擴(kuò)增后的腺病毒。 整個(gè)操作流程沒有超速離心步驟，而是使用了一種特別的選擇性結(jié)合腺病毒粒子的膜來進(jìn)行色譜純化。將純化膜裝在一個(gè)小型的一次性濾芯中，可安全安裝在標(biāo)準(zhǔn)尺寸的Luer-Lok注射器上。為了方便使用，注射器和過濾器組件都是預(yù)組裝好的，隨時(shí)可以使用。在過濾器和注射器之間還裝配了一個(gè)單向閥，省去了純化和洗滌過程中拆裝注射器的麻煩。含有腺病毒的培養(yǎng)液通過連接到單向閥的管子吸入注射器，然后通過推出過濾器進(jìn)行純化。當(dāng)含有病毒的培養(yǎng)液通過過濾器時(shí)，腺病毒粒子會(huì)吸附在膜上，將其從溶液中有效地分離出來。然后對結(jié)合在膜上病毒粒子進(jìn)行洗滌和洗脫就可以獲得高度純化的病毒粒子。 這種純化方法純化的病毒滴度和純度，與CsCl密度梯度離心法所獲得的效果是相當(dāng)?shù)?，病毒粒子和感染單位比可低?0:1。與CsCl密度梯度離心法不同的是，這種方法安全有效，不需要經(jīng)過嚴(yán)格的培訓(xùn)，也不需要昂貴的設(shè)備，只需要簡單操作就可以穩(wěn)定獲得高產(chǎn)量的純化腺病毒。 對于大量病毒純化，我們還貼心準(zhǔn)備了大容量工具包。在這個(gè)工具包中，提供了注射泵來驅(qū)動(dòng)澄清的裂解產(chǎn)物通過三層過濾器。在結(jié)合、洗滌和洗脫過程中，注射泵恒定的壓力和流速非常有助于病毒回收。 |
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| Takara Bio作為重要的生物技術(shù)企業(yè)，在病毒基因?qū)胂到y(tǒng)方面造詣?lì)H深、體系完備，擁有慢病毒系統(tǒng)、逆轉(zhuǎn)錄病毒系統(tǒng)、腺相關(guān)病毒系統(tǒng)、腺病毒全套解決方案，為相關(guān)生物學(xué)基礎(chǔ)研究提供強(qiáng)力支持，為寄予厚望的細(xì)胞與基因治療研究護(hù)航加碼。 |
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頁面更新：2023-10-24 12:51:55
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