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Takara有個小驚喜！助您從雙十一“滿血復(fù)活”?。ㄎ哪叽a抽獎）

聽說很多地方下起了第一場雪，所以這個月的情人節(jié)企劃比以往時候來的稍晚了一些！
今天為大家介紹一種常用在酵母雜交實驗中的陽性克隆驗證方法！
Matchmaker Insert Check PCR Mix 2（Code No. 630497）是2X預(yù)混液，可以簡便快速地直接以酵母菌落為模板進行PCR擴增。
這種完整的混合液專用于Matchmaker Gold酵母單雜交和雙雜交篩選系統(tǒng)，可以快速地擴增、分選并分析文庫篩選所獲得的陽性克隆中prey/文庫質(zhì)粒的cDNA插入片段。混合液與使用以下載體構(gòu)建的GAL4 AD文庫兼容：pGADT7、 pGADT7-Rec、pGADT7-Rec2、pGAD424、pACT、 pACT2、pGAD GH、 pGAD GL及pGAD10。
Matchmaker Insert Check PCR Mix 2 包含PCR聚合酶、引物、dNTPs和緩沖液，僅僅需要將細(xì)胞添加到混合液中，然后進行30個循環(huán)PCR操作就可以快速驗證。
Matchmaker Insert Check PCR Mix 2是完整的混合液。但是若想單獨購買引物，也有另外的選擇。
Matchmaker AD LD-Insert Screening Amplimer Set（Code No. 630433）結(jié)合Advantage 2 PCR polymerase使用，可以從Matchmaker GAL4 激活結(jié)構(gòu)域(AD)載體上擴增插入片段。5'引物可作為測序引物使用。

實驗例：使用菌落PCR快速擴增篩選陽性候選克隆

通過Matchmaker Insert Check PCR Mix 2驗證隨機選擇的15個使用Matchmaker Gold系統(tǒng)獲得的陽性克隆插入片段（第2-16泳道）。使酵母雜交實驗結(jié)果得到克隆子序列能夠被快速分選以進行下一步分析。

多款實驗關(guān)聯(lián)好物，強烈推薦！

♦ Matchmaker Gold酵母雙雜交系統(tǒng)是深受歡迎的Matchmaker產(chǎn)品線中研究蛋白質(zhì)—蛋白質(zhì)相互作用的一款產(chǎn)品。系統(tǒng)中包含新的Y2HGold酵母菌株、更加嚴(yán)密的篩選報告基因、簡單易用的文庫、高水平表達的載體以及基于SMART技術(shù)的文庫構(gòu)建試劑盒。
♦ Matchmaker Gold酵母單雜交（Y1H）文庫篩選系統(tǒng)為鑒定蛋白質(zhì)-DNA相互作用提供了簡便高效的方法。所有的Matchmaker Gold系統(tǒng)均采用篩選強度較高的Aureobasidin A（AbAr）抗生素報告基因。這種新型的報告子可以高效殺死非抗性克隆，從而大大降低了背景克隆的生長。
♦ Normalized Mate and Plate Libraries是高度復(fù)雜的cDNA文庫，文庫克隆到GAL4 AD載體上并轉(zhuǎn)化到酵母菌株Y187中。因為文庫擴增和酵母轉(zhuǎn)化操作已經(jīng)完成，所以使用這些文庫進行雙雜交篩選更加省時省力。均一化處理降低了文庫中高豐度的轉(zhuǎn)錄本，低豐度及稀少的cDNA得以富集，這樣的文庫更加具有基因代表性，也使篩選操作更加簡單，并大大降低了在篩選文庫時獲得假陽性的可能性。
♦ Make Your Own Mate & Plate Library System可以用于自制文庫。利用該系統(tǒng)，一周之內(nèi)即可構(gòu)建足夠用于數(shù)百次酵母雙雜交篩選實驗的所需文庫。文庫構(gòu)建是在Y187文庫酵母菌株中通過酵母高效的同源重組機制直接完成的，無需進行傳統(tǒng)文庫構(gòu)建過程中的一些繁冗的操作 (比如文庫克隆、擴增和大腸桿菌收集等)。

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頁面更新：2023-11-20 15:23:42

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