本制品是采用TB Green嵌合熒光法進(jìn)行One Step Real Time RT-PCR反應(yīng)的專用試劑。使用本制品進(jìn)行Real Time RT-PCR反應(yīng)可在同一反應(yīng)管內(nèi)連續(xù)進(jìn)行,操作簡單,并能有效防止污染。本反應(yīng)體系由于可以對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測,大大提高了檢測靈敏度,并省略了PCR反應(yīng)后的電泳步驟,非常適合于RNA病毒等微量RNA的檢測。
使制品中使用了一種新的反轉(zhuǎn)錄酶PrimeScript PLUS RTase,具有很強(qiáng)的鏈置換活性,且在短時(shí)間內(nèi)有效合成cDNA;和高效的熱啟動(dòng)PCR酶TaKaRa Ex Taq® HS組合,能進(jìn)行高靈敏度和高效率檢出。另外,本制品使用了含抗Taq抗體的TaKaRa Ex Taq HS熱啟動(dòng)PCR酶和適合Real Time PCR的Buffer大大地提高了反應(yīng)的特異性。本制品中的這些酶結(jié)合Takara Bio RT-PCR技術(shù),可更有效地?cái)U(kuò)增RT-PCR產(chǎn)物。
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■ 保存 |
-20℃。
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2X One Step TB Green RT-PCR Buffer 4 請(qǐng)于-20℃避光保存。 |
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■ 試劑盒特長 |
1. 進(jìn)行Real Time One Step RT-PCR反應(yīng),可以快速、準(zhǔn)確地對(duì)RNA病毒等微量RNA 進(jìn)行分析。
2. 新的反轉(zhuǎn)錄酶PrimeScript PLUS RTase和TaKaRa Ex Taq HS組合,能進(jìn)行高靈敏度和高效率檢出;含抗Taq抗體的TaKaRa Ex Taq HS熱啟動(dòng)PCR酶,能有效抑制非特異性擴(kuò)增,大大提高了反應(yīng)的特異性。
3. 在2×濃度的Premix中,預(yù)先混有TB Green,PCR反應(yīng)液配制時(shí),操作簡單方便。 |
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■ 注意事項(xiàng) |
1. 當(dāng)同時(shí)需要進(jìn)行數(shù)次Real Time One Step RT-PCR反應(yīng)時(shí),應(yīng)先配制各種試劑的混合液 (Master Mix;其中包括RNase Free dH2O、Buffer、各種酶等),然后再分裝到每個(gè)反應(yīng)管中。這樣,可使所取的試劑體積更準(zhǔn)確,減少試劑損失,避免重復(fù)分取同一試劑。同時(shí)也可以減少實(shí)驗(yàn)操作或?qū)嶒?yàn)樣品之間產(chǎn)生的誤差。
2. 使用PrimeScript PLUS RTase和TaKaRa Ex Taq HS 時(shí),應(yīng)輕輕混勻,避免起泡;分取之前要小心地離心收集到反應(yīng)管底部;由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取時(shí)應(yīng)慢慢吸取。
3. 2X One Step TB Green RT-PCR Buffer 4 融解后如有不溶物請(qǐng)充分混合,使用Vortex 等振蕩完全溶解后使用。
4. 反應(yīng)液的配制、分裝請(qǐng)一定使用新的 (無污染的) 槍頭、Microtube等,盡量避免污染。
5. 制品只能使用基因特異性反轉(zhuǎn)錄引物,不能使用Random Primer 和Oligo dT Primer 等進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。 |
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