本制品是采用TB Green嵌合熒光法進(jìn)行Real Time PCR的專用試劑。制品中適用于快速PCR反應(yīng)的突變型Taq DNA聚合酶與適合抗Taq抗體的反應(yīng)液組合使用,可降低引物二聚體出現(xiàn)頻率,實(shí)現(xiàn)快速PCR反應(yīng)和在寬廣的動(dòng)態(tài)定量區(qū)域內(nèi)對(duì)靶基因進(jìn)行準(zhǔn)確定量、檢測(cè),重復(fù)性好。此外, 2X Premix試劑中,已預(yù)先添加了Tli RNaseH (耐熱性RNaseH) ,以cDNA作為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí),可以很好抑制由于cDNA中殘存mRNA對(duì)PCR反應(yīng)造成的阻害作用。通過(guò)對(duì)酶和PCR反應(yīng)液組份改良后,可適用于稍長(zhǎng)片段的靶基因和高GC含量的靶基因,對(duì)PCR阻害物也有很強(qiáng)的抵抗性。本制品是2×濃度的Premix型試劑,預(yù)先混有適合實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)濃度的TB Green,配制PCR反應(yīng)液十分簡(jiǎn)便。
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■ 保存 |
4℃。
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注意: |
4℃可保存6個(gè)月。 |
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避光保存,避免污染。 |
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長(zhǎng)期保存請(qǐng)置于-20℃,一旦開(kāi)始使用請(qǐng)于4℃保存并在6個(gè)月之內(nèi)使用完。 |
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■ 試劑盒特長(zhǎng) |
1. 通過(guò)Real Time PCR反應(yīng),可以快速、準(zhǔn)確地對(duì)目的基因進(jìn)行檢測(cè)、定量。
2. 本制品是預(yù)先混有TB Green的2X 濃度的Premix試劑,只需加入引物、模板、滅菌水便可通過(guò)嵌合熒光檢測(cè)法進(jìn)行Real Time PCR反應(yīng)。
3. PCR反應(yīng)使用的是可進(jìn)行快速PCR反應(yīng)的突變型Taq HS。由于優(yōu)化的反應(yīng)Buffer非常適用于Real Time PCR,因此擴(kuò)增效率高,可以進(jìn)行高靈敏度的檢出。
4. 在2X Premix試劑中,預(yù)先添加了耐熱性RNaseH (Tli RNaseH) ,可以很好抑制以cDNA作為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí),由于cDNA中殘存mRNA對(duì)PCR反應(yīng)造成的阻害作用。
5. 酶和PCR反應(yīng)液組份通過(guò)改良后,提高了對(duì)PCR阻害物的抵抗性。 |
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■ 注意事項(xiàng) |
1. 進(jìn)行Real Time RT-PCR反應(yīng)時(shí),反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所用的試劑推薦使用:
PrimeScript™ RT reagent Kit (Perfect Real Time) (Code No. RR037Q/A/B)
PrimeScript RT Master Mix (Perfect Real Time) (Code No. RR036Q/A/B)
以上制品與本制品組合使用可以得到可信度高的結(jié)果。
本制品與PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time) (Code No. RR047Q/A/B) 或PrimeScript™ FAST RT reagent Kit with gDNA Eraser(Code No. RR092S/A/B)組合使用時(shí),有時(shí)反應(yīng)性能不好,不推薦使用。
2. 使用前,請(qǐng)上下輕輕顛倒混勻,避免產(chǎn)生氣泡,試劑混勻后再使用。試劑混合不均勻會(huì)造成反應(yīng)效果不佳。
(1)
請(qǐng)勿渦旋振蕩混勻。
(2) TB Green Fast qPCR Mix (2X) 在-20℃保存時(shí),可能會(huì)產(chǎn)生白色或淡黃色的沉淀。可用手握緩慢溶解,或于室溫短時(shí)間避光放置后,上下顛倒混勻直至沉淀全部消失。
(3) 沉淀會(huì)導(dǎo)致試劑組份不均勻,必須混勻后再使用。
3. 配制反應(yīng)液時(shí),試劑請(qǐng)于冰上放置。
4. 本制品中含有熒光染料TB Green,配制PCR反應(yīng)液時(shí)應(yīng)避免強(qiáng)光照射。
5. 反應(yīng)液的配制、分裝請(qǐng)一定使用新的一次性槍頭、盡量避免樣品間的污染。
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