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哺乳動(dòng)物雙雜交系統(tǒng)
品牌	Code No.	產(chǎn)品名稱	包裝量	價(jià)格（元）	說(shuō)明書	數(shù)量
Clontech	630305	Matchmaker Mammalian Assay Kit 2	Each	￥9,783

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無(wú)標(biāo)題文檔

	酵母雙雜篩選				互作蛋白質(zhì)驗(yàn)證
		→
			↓ 插入片段確認(rèn)	→

			↓
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			↓

			↓

■ 制品說(shuō)明

哺乳動(dòng)物雙雜交系統(tǒng)

Matchmaker Mammalian Two-Hybrid Assay Kit 2 可以快速簡(jiǎn)便的分析在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的蛋白質(zhì)之間的相互作用，試劑盒采用分泌型的報(bào)告子SEAP檢測(cè)感興趣的兩個(gè)蛋白質(zhì)之間的互作，避免了裂解細(xì)胞的操作。
由于雙雜交檢測(cè)發(fā)生在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，哺乳動(dòng)物cDNA編碼的蛋白質(zhì)更接近于天然構(gòu)象，因此，轉(zhuǎn)錄后修飾及實(shí)驗(yàn)結(jié)果更能代表生物過(guò)程中的重要互作。
Matchmaker Mammalian Two-Hybrid Assay Kit 2與Matchmaker Gold Two-Hybrid System基于同樣的原理，即表達(dá)的兩個(gè)融合蛋白質(zhì)分別包含DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域或激活結(jié)構(gòu)域。若蛋白質(zhì)之間發(fā)生互作，則pG5-SEAP質(zhì)粒上的SEAP報(bào)告基因被激活而發(fā)生轉(zhuǎn)錄。

■ 制品特點(diǎn)

1. 在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)簡(jiǎn)便迅速地分析蛋白質(zhì)之間的互作
2. 分泌型的SEAP報(bào)告子避免了細(xì)胞裂解的繁瑣操作
3. 分析結(jié)果更加真實(shí)

■ 制品用途

1. 哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)確認(rèn)蛋白質(zhì)的互作
2. 確定互作區(qū)域

■ 實(shí)驗(yàn)操作流程圖

圖1 Matchmaker Mammalian Two-Hybrid Assay Kit 2操作流程

圖2 化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)蛋白質(zhì)之間的相互作用

誘餌載體pM-53表達(dá)的p53蛋白質(zhì)融合GAL4 DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域。將bait載體與SV40大抗原prey載體（pVP16-T）共轉(zhuǎn)化到HEK293細(xì)胞中，由于大T抗原與p53發(fā)生互作，可以檢測(cè)到SEAP的高強(qiáng)度表達(dá)。CP蛋白質(zhì)與p53蛋白質(zhì)沒(méi)有較強(qiáng)的互作，作為陰性對(duì)照。

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頁(yè)面更新：2023-02-14 13:46:35

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