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■ 制品內(nèi)容 |
1 ml標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系可進(jìn)行500次反應(yīng),使用微孔板的200 μl微量反應(yīng)體系可進(jìn)行2,500次反應(yīng)。 |
BCA Reagent A |
250 ml×2支 |
BCA Reagent B |
20 ml×1支 |
BSA Standard Solution (2 mg/ml)* |
1 ml×10支 |
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*:BSA Standard Solution (牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品溶液) 保存在0.9% NaCl和0.05%
NaN3溶液中。
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■ 制品說明 |
本制品是一種對(duì)蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行高靈敏度比色定量的試劑盒,可用于含有表面活性劑蛋白質(zhì)溶液的定量。BCA蛋白質(zhì)定量包括兩步反應(yīng),首先,二價(jià)銅離子 (Cu2+) 在堿性條件下被蛋白質(zhì)的肽鍵還原成一價(jià)銅離子 (Cu+) ,還原后的銅離子濃度與溶液中所含蛋白質(zhì)濃度成正比。其次,兩個(gè)分子的bicinchoninic acid (BCA) 絡(luò)合一個(gè)一價(jià)銅離子 (Cu+) ,形成一種在562 nm處有強(qiáng)吸收值的紫色復(fù)合物。本制品依此為原理,根據(jù)測(cè)定562 nm處光吸收值,與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比,獲得待測(cè)蛋白的濃度定量。使用BCA法進(jìn)行蛋白質(zhì)定量具有以下特點(diǎn):1. 不受蛋白質(zhì)種類的影響,在0.02~2 mg/ml濃度范圍內(nèi)蛋白質(zhì)濃度與吸光度值成線性關(guān)系;2. 對(duì)表面活性劑的干擾影響小。但由于還原劑和螯合劑對(duì)反應(yīng)有阻害性,因此本制品不適用于含有還原劑或者螯合劑的蛋白質(zhì)樣品的定量。詳細(xì)信息見說明書中“附錄”的表1。
使用本制品進(jìn)行樣品定量時(shí),可使用試劑盒中附帶的BSA Standard Solution制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。 |
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■ 保存 |
BCA Reagent A、BCA Reagent B : 室溫保存
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BSA Standard Solution : 4℃
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*:該試劑盒在4℃下運(yùn)輸收貨后,BCA Reagent A、BCA Reagent B請(qǐng)于室溫保存。
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■ 使用注意 |
以下為使用本試劑盒時(shí)的注意事項(xiàng),使用前請(qǐng)一定認(rèn)真閱讀。
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1. BSA Standard Solution使用前室溫放置,恢復(fù)至室溫或在20~50℃的水浴中復(fù)溫。輕彈混勻,輕微離心后使用。
2. 稀釋檢測(cè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品時(shí),可使用去離子水、0.9% NaCl或PBS。
3. BCA Reagent A和BCA Reagent B在低溫下可能會(huì)產(chǎn)生沉淀物。使用前于20~37℃保溫,輕輕振蕩混合,使沉淀物完全溶解后再使用。
4. 如果沒有配備562 nm濾光片,可選擇540~570 nm的濾光片進(jìn)行測(cè)定,不會(huì)對(duì)蛋白定量產(chǎn)生影響。
5. 高濃度樣品測(cè)定之后,用水充分沖洗比色皿后再使用。色素殘留在比色皿上會(huì)影響低濃度樣品的測(cè)定。
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■ 關(guān)聯(lián)資料 |
Western Blotting實(shí)驗(yàn)操作指南:
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