| SARS-CoV-2假病毒宿主細(xì)胞 | ||||||
| 品牌 | Code No. | 產(chǎn)品名稱 | 包裝量 | 價(jià)格（元） | 說(shuō)明書 | 數(shù)量 |
| Clontech | 631289 | Human ACE2 293T Cell Line（本品僅限北京地區(qū)銷售） | 1 ml | ￥28,727 |
|
|
| SARS-CoV-2進(jìn)入宿主細(xì)胞是由刺突蛋白與ACE2受體之間的相互作用所介導(dǎo)的。為了助力病毒與受體相互作用研究和COVID-19療法開(kāi)發(fā)，我們開(kāi)發(fā)了在CMV啟動(dòng)子控制下穩(wěn)定表達(dá)ACE2的HEK細(xì)胞。已證實(shí)，經(jīng)過(guò)多次傳代該細(xì)胞依然可持續(xù)高水平表達(dá)ACE2，并可被使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制備的SARS-CoV-2假病毒高效轉(zhuǎn)導(dǎo)。 |
| ACE2是一種含鋅金屬酶，位于內(nèi)皮細(xì)胞和其他類型細(xì)胞的表面。這種跨膜蛋白可將血管緊張素I轉(zhuǎn)化為血管緊張素1-9(一種在心肌細(xì)胞中起抗肥厚作用的9-氨基酸肽)，并將血管緊張素II轉(zhuǎn)化為血管緊張素1-7，這是一種有益的血管擴(kuò)張劑和防擴(kuò)散劑。 |
| Human ACE2 293T Cell Line由編碼ACE2的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)HEK細(xì)胞構(gòu)建而成。通過(guò)RT-qPCR方法證實(shí)，該細(xì)胞經(jīng)亞克隆能高效表達(dá)ACE2。 |
| ■ 概述 |
| · 由CMV啟動(dòng)子控制，組成型表達(dá)ACE2的HEK細(xì)胞 · 經(jīng)多次傳代證實(shí)，ACE2可持續(xù)高效表達(dá) · 可被SARS-CoV-2假病毒 (e.g., 使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制備)高效轉(zhuǎn)導(dǎo) |
| ■ 應(yīng)用 |
| · SARS-CoV-2假病毒中和研究 · 病毒-受體相互作用和病毒侵入分析 |
| ■ 實(shí)驗(yàn)例 |
 |
| 圖1 通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析ACE2表達(dá)情況。使用與Alexa Fluor 488共軛抗ACE2抗體(R&D Systems, Code No. FAB9332G)檢測(cè)表達(dá)在人ACE2 293T細(xì)胞表面的ACE2，未被標(biāo)記的細(xì)胞作為陰性對(duì)照。 |
 |
| 圖2 不同代次細(xì)胞中ACE2穩(wěn)定表達(dá)的情況。使用One Step PrimeScript RT-PCR Kit (Perfect Real Time) (Code No. RR064A)通過(guò)RT-qPCR方法，測(cè)定人ACE2 293T連續(xù)細(xì)胞代次中ACE2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平。以三個(gè)重復(fù)測(cè)定的管家基因ACTB Ct值為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)ACE2表達(dá)的Ct值進(jìn)行歸一化處理。通過(guò)計(jì)算2^(-ΔΔCt)，確定相對(duì)于293T細(xì)胞，穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞中ACE2的表達(dá)情況。 |
 |
| 圖3 使用表達(dá)ZsGreen1綠色熒光蛋白質(zhì)的SARS-CoV-2假病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)人ACE2 293T細(xì)胞。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制備攜帶野生型或者D614G變異型刺突蛋白（截短形式）并表達(dá)ZsGreen1綠色熒光蛋白質(zhì)的慢病毒粒子。Panel A為感染72小時(shí)后被轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的顯微圖像。Panel B為在轉(zhuǎn)導(dǎo)6天后，通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)定的每個(gè)樣品的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。 |
 |
| 圖4 使用表達(dá)熒光素酶的SARS-CoV-2假病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)人ACE2 293T細(xì)胞。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制備攜帶野生型或者D614G變異型刺突蛋白（全長(zhǎng)或者截短形式）并表達(dá)螢火蟲熒光素酶的慢病毒粒子。取10 μl 濃縮病毒液（21倍）轉(zhuǎn)導(dǎo)人ACE2 293T細(xì)胞。轉(zhuǎn)導(dǎo)6天后測(cè)定熒光素酶活性，以不表達(dá)包膜蛋白的病毒作為對(duì)照，測(cè)定熒光素酶活性背景值。 |
 |
| 圖5 使用人ACE2 293T細(xì)胞進(jìn)行中和試驗(yàn)，以非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物恢復(fù)期混合血清作為阻斷劑。野生型（截短形式）SARS-CoV-2假病毒與梯度稀釋的恢復(fù)期血清(BEI Resources，Code. NR-52401)孵育后轉(zhuǎn)導(dǎo)人ACE2 293T細(xì)胞。感染3天后測(cè)定熒光素酶水平，作為病毒感染讀數(shù)。圖示數(shù)據(jù)為中和作用相對(duì)于僅病毒控制感染的百分比。數(shù)值為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，實(shí)驗(yàn)設(shè)置3個(gè)平行重復(fù)。陰性對(duì)照組添加健康獼猴血清作為阻斷劑。 |
 |
| 圖6 使用人ACE2 293T細(xì)胞進(jìn)行中和試驗(yàn)，以可溶性ACE2蛋白作為阻斷劑。Panels A和B梯度稀釋與IgG (ACE2-Fc)Fc結(jié)構(gòu)域相融合的可溶性ACE2蛋白，和SARS-CoV-2假病毒一起轉(zhuǎn)導(dǎo)人ACE2 293T細(xì)胞。圖示數(shù)據(jù)為中和作用相對(duì)于僅病毒控制感染的百分比。數(shù)值為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，實(shí)驗(yàn)設(shè)置3個(gè)平行重復(fù)。 |
產(chǎn)品詳情請(qǐng)點(diǎn)擊： |
頁(yè)面更新：2021-08-23 15:51:05
|
使用規(guī)章丨聯(lián)系方式丨 關(guān)于個(gè)人信息的保護(hù)丨特別說(shuō)明
寶日醫(yī)生物技術(shù)（北京）有限公司
Copyright ? 2015 Takara Biomedical Technology (Beijing) Co., Ltd. All rights reserved. 京ICP備06030419號(hào)-1
京公網(wǎng)安備 110114000405號(hào)
