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雜交用DNA探針制備試劑盒Random Primer DNA Labeling Kit Ver.2
品牌	Code No.	產(chǎn)品名稱	包裝量	價(jià)格（元）	說明書	數(shù)量
Takara	6045	Random Primer DNA Labeling Kit Ver.2	30 Rxns	￥781

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■ 制品內(nèi)容 (30 次量)

Random Primer (9 mer)	60 μl
10 × Buffer	75 μl
dNTP Mixture (dGTP,dATP,dTTP各0.2 mM)	75 μl
Exo-free Klenow Fragment (2 U/μl)	30 μl
Control DNA solution (λ-Hind III digest 25 ng/μl)	10 μl

■ 制品說明

本試劑盒利用 [α-³²P]或[³H]dCTP標(biāo)記DNA，制備具有高比活性的雜交用DNA探針。本試劑盒的設(shè)計(jì)以Feinberg和Vogelstein法為基礎(chǔ)加以了改進(jìn)，利用9個(gè)堿基的隨機(jī)寡聚核苷酸引物以及E. coli DNA Polymerase I 的 Exonuclease-free Klenow Fragment (無3' →5' 外切酶活性) ，在短時(shí)間內(nèi) (2-3分鐘)即能得到比活性為1×10⁹ dpm/μg的探針。它克服了表1中切口平移法的許多缺點(diǎn)。

■ 原理

利用雜交法檢定具有特異序列的DNA時(shí)，必須使用高比放射活性的DNA探針。Feinberg和Vogelstein發(fā)表的隨機(jī)引物標(biāo)記法從少量DNA (10-20 ng) 制得的探針具有很高的比活性，并且可以直接在低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠中標(biāo)記DNA片段。原理如圖1所示。首先通過熱變性使模板DNA變?yōu)閱捂淒NA，然后使隨機(jī)引物與單鏈DNA退火，再利用Klenow Fragment合成互補(bǔ)鏈形成標(biāo)記和未標(biāo)記的核苷酸。

表1

	切口平移法	隨機(jī)引物法
反應(yīng)時(shí)間	延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間會(huì)降低標(biāo)記效率。	短時(shí)間內(nèi)即可得到高比活性的探針。即使反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)也不受影響。
探針比活性	～10⁸ dpm/μg	～10⁹ dpm/μg
模板純度	瓊脂糖等抑制反應(yīng)	瓊脂糖對(duì)反應(yīng)沒有影響
反應(yīng)后純化	需要除去未反應(yīng)的dNTP	不需要除去未反應(yīng)的dNTP
模板量要求	≥1 μg	≥25 ng

以上對(duì)比數(shù)據(jù)的依據(jù)：以50 μCi的[α-³²P]dCTP(370 MBq/ml)標(biāo)記λ DNA-Hind III，以此為模板進(jìn)行多重對(duì)照實(shí)驗(yàn)。

圖1 Random Primer Labeling原理

頁面更新：2024-02-29 08:29:58

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參考文獻(xiàn)

Random Primer DNA Labeling Kit Ver.2的使用文獻(xiàn)

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