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■ 制品內(nèi)容 (25 μl反應(yīng)×100 次量) |
Retrovirus Primer Mix for Provirus, Human (10 pmol/μl each) |
50 μl |
Retrovirus Probe for Provirus, Human (10 pmol/μl)* |
50 μl |
hIFNγ Primer Mix for Provirus (10 pmol/μl each) |
50 μl |
hIFNγ Probe for Provirus (10 pmol/μl)* |
50 μl |
DNA Control Template for Provirus, Human (200 pg/μl) |
15 μl |
EASY Dilution (for Real Time PCR) |
1 ml × 4 |
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* 熒光標記探針應(yīng)避光保存。 |
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■ 制品說明 |
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本制品是利用Real Time PCR方法對以MLV(murine leulcemia Virus: 鼠白血病病毒) 為基礎(chǔ)的逆轉(zhuǎn)錄病毒 (Retrovirus) 載體向人體正常細胞中導(dǎo)入基因時,測定前病毒拷貝數(shù)的試劑盒。前病毒 (Provirus) 是指逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組整合至宿主DNA中的狀態(tài),此狀態(tài)稱為前病毒。
本制品與CycleavePCR Core Kit (Code No.: CY501) 組合使用,通過測定導(dǎo)入基因的人體正常細胞基因組DNA來測定前病毒拷貝數(shù)。另外,本制品擴增的區(qū)域為MLV的包裝信號區(qū),因此,可以測定大部分以MLV為基礎(chǔ)的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導(dǎo)入人體正常細胞后的前病毒拷貝數(shù)。
傳統(tǒng)的前病毒測定方法是把導(dǎo)入基因的宿主細胞克隆后,通過Southern blotting方法進行測定,計算出前病毒的平均拷貝數(shù)。計算平均拷貝數(shù)需要大量克隆進行Southern blotting,此方法耗時、費力。使用本制品不需要進行細胞的克隆即可簡單地計算出前病毒的拷貝數(shù)。
與本制品組合使用的CycleavePCR Core Kit是采用Cycling探針法進行Real Time PCR反應(yīng)的專用試劑盒,具有檢出特異性高的優(yōu)勢,能夠抑制背景基因組DNA的影響,從而簡單、準確地對目的基因進行定量分析。 |
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■ 保存 |
-20℃。 |
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■ 注意事項 |
1. 應(yīng)先配制各種試劑的混合液,將dH2O、buffer 、酶等配制成Master Mix,可以減少試劑的損失及分裝、混合的次數(shù),使反應(yīng)試劑體積更準確,防止實驗結(jié)果之間產(chǎn)生誤差。
2. 使用前將CycleavePCR Core Kit (Code No.: CY501) 中含有的TaKaRa Ex Taq HS和Tli RNase H II輕離心至Tube底部后再使用;由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取時應(yīng)慢慢吸取;酶類制品應(yīng)在實驗前從-20℃中取出,使用后立即放入-20℃保存。
3. CycleavePCR Core Kit (Code No.: CY501) 中含有的10×CycleavePCR Buffer在保存過程中有時會產(chǎn)生沉淀物,溶解后不影響使用。Vortex使其完全溶解后再使用。
4. 分裝試劑時務(wù)必使用新的槍頭 (Tip),以防止樣品間污染。 |
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