| 單細(xì)胞mRNA全長(zhǎng)分析SMART-Seq HT Kit | ||||||
| 品牌 | Code No. | 產(chǎn)品名稱 | 包裝量 | 價(jià)格（元） | 說(shuō)明書 | 數(shù)量 |
| Clontech | 634455 | SMART-Seq® HT Kit(庫(kù)存銷售完畢即終賣) | 12 Rxns | ￥4,769 |
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| Clontech | 634456 | SMART-Seq® HT Kit(庫(kù)存銷售完畢即終賣) | 48 Rxns | ￥17,137 |
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| Clontech | 634437 | SMART-Seq® HT Kit(庫(kù)存銷售完畢即終賣) | 96 Rxns | ￥33,001 |
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| Clontech | 634438 | SMART-Seq® HT Kit(庫(kù)存銷售完畢即終賣) | 192 Rxns | ￥60,924 |
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| Clontech | 634439 | SMART-Seq® HT Lysis Components | 96 Rxns | ￥1,284 |
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| SMART-Seq HT Kit & SMART-Seq HT Plus Kit：自動(dòng)化友好型的單細(xì)胞mRNA全長(zhǎng)分析 | ||||||||||||||||||||
| · 自動(dòng)化友好型 - 兼容自動(dòng)化工作站，更少的時(shí)間分析更多的樣本 · 高靈敏度 - 可以從單細(xì)胞或10 pg總RNA起始（起始量：1-100個(gè)細(xì)胞或10 pg-1 ng總RNA） · 高質(zhì)量的RNA-Seq數(shù)據(jù) - 保留全長(zhǎng)基因信息，低rRNA比率，高基因檢出數(shù)，有效擴(kuò)增GC-rich轉(zhuǎn)錄本 · 單管操作流程 - SMART-Seq HT PLUS Kit包含完整的cDNA合成和文庫(kù)構(gòu)建流程，分別在單管中進(jìn)行，減少樣品損失與混淆，降低手動(dòng)操作誤差 · 增強(qiáng)的測(cè)序性能 - SMART-Seq HT PLUS Kit整合雙端特殊index（UDI），即便多個(gè)文庫(kù)pool后用高通量型illumina測(cè)序儀（如Novaseq）分析，也能得到正確結(jié)果 · 更高的文庫(kù)產(chǎn)量 - 更便于使用高通量型illumina測(cè)序儀測(cè)序（如Novaseq），或保存剩余的文庫(kù)用于多次測(cè)序 |
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| 注意： SMART-Seq mRNA HT是SMART-Seq HT Kit的等效替代品，本次更新并不影響這些試劑盒的流程和性能。 | ||||||||||||||||||||
| ■ 產(chǎn)品說(shuō)明 | ||||||||||||||||||||
| SMART-Seq HT Kit（SS-HT）和SMART-Seq HT Plus Kit（SS-HT PLUS）均兼容自動(dòng)化移液工作站，采用oligo(dT)引物，支持1-100個(gè)細(xì)胞或10 pg-1 ng總RNA起始。 SS-HT試劑盒是從第4代的SMARTer Ultra Low試劑（SMART-Seq v4）發(fā)展而來(lái)的，具有簡(jiǎn)化的操作流程，將原有的反轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增步驟整合為一步，且不影響性能。細(xì)胞分離或RNA提取后，僅通過(guò)一步RT-PCR擴(kuò)增雙鏈cDNA，然后進(jìn)行純化完成操作。cDNA合成可在4小時(shí)內(nèi)完成，整個(gè)文庫(kù)構(gòu)建方案可在2天內(nèi)完成。而且，SMART-Seq HT試劑盒具有與SMART-Seq v4試劑盒相同的靈敏度和可重復(fù)性。核心的SMART技術(shù)，是一種對(duì)全轉(zhuǎn)錄組研究，以及包括細(xì)胞內(nèi)剪接位點(diǎn)，可變剪接研究的非常強(qiáng)大的工具，且可以檢測(cè)全長(zhǎng)基因。 Oligo（dT）可以從高品質(zhì)總RNA（RIN> 8）或完整細(xì)胞中特異性擴(kuò)增mRNA。 通過(guò)采用LNA技術(shù)，提升了模板轉(zhuǎn)換的效率與基因檢出數(shù)等性能。 SS-HT PLUS Kit在包含核心的cDNA合成試劑基礎(chǔ)上，同時(shí)整合了Takara Bio Group專利性的文庫(kù)構(gòu)建技術(shù)（U.S. Patents 7,803,550, 8,399,199, 8,728,737, 9,598,727,10,196,686, 10,208,337, and 11,072,823）及單次使用的雙端特殊index（UDI），提供完整的單細(xì)胞cDNA合成到文庫(kù)構(gòu)建的實(shí)驗(yàn)體驗(yàn)。建庫(kù)試劑中包含片段化酶，以實(shí)現(xiàn)對(duì)合成cDNA的片段化，接著利用特別的莖環(huán)形接頭構(gòu)建高品質(zhì)illumina文庫(kù)。在建庫(kù)階段，單管兩步操作、過(guò)程中無(wú)需純化、2 h即可建成文庫(kù)！ |
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| ■ SS-HT Kit：流程縮短、性能不變！ | ||||||||||||||||||||
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| 圖1 SMART-Seq HT的技術(shù)流程 | ||||||||||||||||||||
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| 圖2 SMART-Seq v4和SMART-Seq HT工作流程的比較 | ||||||||||||||||||||
| SMART-Seq HT（右）是由SMART-Seq v4方法（左）經(jīng)過(guò)改進(jìn)而來(lái)的一個(gè)手動(dòng)操作時(shí)間更短的高通量工作流程。使用FACS方法獲得單細(xì)胞，SMART-Seq HT試劑盒只需3個(gè)操作步驟即可制備cDNA，而SMART-Seq v4試劑盒需要6步。SMART-Seq HT工作流程的一個(gè)重要步驟是一步RT-PCR，即使用一步RT-PCR緩沖液，進(jìn)行高效的反轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增cDNA的過(guò)程。 | ||||||||||||||||||||
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| 圖3 使用SMART-seq v4 kit和SMART-Seq HT kit從FACS分選的293T細(xì)胞中獲得的高重復(fù)性的基因表達(dá)數(shù)據(jù) | ||||||||||||||||||||
| 使用SMART-Seq v4試劑盒（SSv4_1-SSv4_12）和SMART-Seq HT試劑盒（ HT_1-HT_9）（上圖）從21個(gè)293T細(xì)胞單細(xì)胞制備文庫(kù)，并對(duì)每個(gè)細(xì)胞獲得的基因表達(dá)性進(jìn)行評(píng)估。層次聚類熱圖展示了所有細(xì)胞之間的Euclidean distances，并顯示從0.74到0.97的Pearson相關(guān)性。不僅用相同試劑盒制備的細(xì)胞之間可以觀察到非常高的相關(guān)性，而在兩種試劑盒之間的相關(guān)性也非常高。這些數(shù)據(jù)表明，SMART-Seq HT的工作流程與SMART-Seq v4相比，在基因表達(dá)分析中沒有顯著的偏差。 | ||||||||||||||||||||
| ■ SS-HT PLUS Kit：不只是一個(gè)Kit，更是完整的單細(xì)胞RNA-Seq建庫(kù)體驗(yàn)！ | ||||||||||||||||||||
| 為了使單細(xì)胞cDNA合成、文庫(kù)構(gòu)建實(shí)驗(yàn)“一步”到位，我們?nèi)峦瞥隽薙S-HT PLUS Kit。 | ||||||||||||||||||||
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| 從高靈敏度、高重復(fù)性的cDNA合成出發(fā)，構(gòu)建更高品質(zhì)illumina文庫(kù) | ||||||||||||||||||||
| Takara科學(xué)家從10 pg小鼠腦total RNA起始，采用SMART-Seq HT Kit完成cDNA合成。隨后分別使用SS-HT Plus Kit中的SMART-Seq Library Prep Kit模塊與市面上較常用的A公司試劑盒構(gòu)建文庫(kù)，并比較性能差異。 | ||||||||||||||||||||
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| (比較數(shù)據(jù)來(lái)源于Takara Bio USA, Inc.) | ||||||||||||||||||||
| 從測(cè)試數(shù)據(jù)中可以看出，SS-HT PLUS Kit所建文庫(kù)的產(chǎn)量是A公司Kit產(chǎn)量的5倍，而更高的文庫(kù)產(chǎn)量更適于高通量型Illumina測(cè)序儀，如Novaseq。 | ||||||||||||||||||||
| 兩種方法所建文庫(kù)隨后用Nextseq 500完成測(cè)序，并對(duì)TPM(Transcripts per million)≥0.1的基因數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。SS-HT PLUS文庫(kù)能比A公司文庫(kù)多檢出10%的基因，從同樣的cDNA起始能“捕獲”更全的信息！ | ||||||||||||||||||||
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| 更多實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)： | ||||||||||||||||||||
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| SS-HT Plus Kit | ||||||||||||||||||||
| 延伸閱讀： | ||||||||||||||||||||
| 單細(xì)胞NGS解決方案 | ||||||||||||||||||||
頁(yè)面更新：2024-11-28 14:48:11
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轉(zhuǎn)錄組分析（灰）.png)
制備（灰）.png)
定量（灰）.png)
胞全長(zhǎng)cDNA制備（黃）.png)
制備系統(tǒng)（灰）.png)
胞RNA-Seq文庫(kù)制備（黃）-.png)