機(jī)構(gòu)用戶解決方案

當(dāng)前位置：首頁 > > 單細(xì)胞分選系統(tǒng)

無標(biāo)題文檔



近幾年，單細(xì)胞測(cè)序是比較熱門的研究方向。但是，理想很豐滿，現(xiàn)實(shí)卻很骨感。要做好單細(xì)胞測(cè)序，還要面臨單細(xì)胞獲取困難、起始量低、人工操作誤差大的問題。

Takara推出單細(xì)胞測(cè)序的技術(shù)專題，從單細(xì)胞獲取、到測(cè)序文庫制備，“手把手”告訴大家怎么選擇，盡可能使大家避開“雷區(qū)”，輕松得到正確的單細(xì)胞分析結(jié)果。同時(shí)這個(gè)專題覆蓋了單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組、單細(xì)胞全基因測(cè)序，單細(xì)胞免疫組庫分析，幫助大家根據(jù)自己的需要更好的進(jìn)行選擇。

■ 怎么又多又快的獲得想要的單細(xì)胞？

ICELL8^® cx Single-Cell System

	獲得單細(xì)胞有很多方法，常見的有手動(dòng)挑選、激光顯微切割、流式細(xì)胞分選等。但這些較為傳統(tǒng)的方法，也因?yàn)榉爆?、通量低、?xì)胞活性差等缺點(diǎn)局限了研究人員對(duì)單細(xì)胞研究的深入探討。ICELL8^®cx Single-Cell System能夠?qū)Υ蟛糠旨?xì)胞種類，簡(jiǎn)單、快速、有效挑選出1,200～1,500個(gè)活的單細(xì)胞。并可根據(jù)不同的研究方向，在該系統(tǒng)上直接實(shí)現(xiàn)諸如Human TCR a/b profiling、全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組等測(cè)序文庫的構(gòu)建，打破了傳統(tǒng)方法的局限性。

推薦閱讀：
ICELL8 cx高通量單細(xì)胞分選平臺(tái)
單細(xì)胞全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組 × 靶向富集—低表達(dá)基因融合事件快現(xiàn)形！

■ 怎么保證低起始量下獲得高品質(zhì)文庫？

「當(dāng)您做單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組研究時(shí)」
低通量單細(xì)胞mRNA分析：SMART-Seq^® v4 Ultra^® Low Input RNA Kit for Sequencing
NGS技術(shù)的出現(xiàn)，使得對(duì)RNA的研究變得更為容易，但是對(duì)于單細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組文庫分析，如何獲得高質(zhì)量的全長(zhǎng)cDNA一直是很具有挑戰(zhàn)性的。Takara公司擁有核心專利SMART技術(shù)（日本專利第 6336080號(hào)），在2011年即推出了可以高靈敏度在單細(xì)胞水平上分析差異表達(dá)、融合基因、可變剪接，并提供全長(zhǎng)信息的cDNA制備試劑。而升級(jí)的SMART-Seq^® v4 Ultra^® Low Input RNA Kit for Sequencing在原有基礎(chǔ)上引入LNA技術(shù)，提升了模板轉(zhuǎn)換效率，可以檢測(cè)到比以往更多的基因。

流程示意圖

較高通量單細(xì)胞mRNA分析：SMART-Seq^® HT Kit
SMART-Seq^® HT Kit旨在以較高通量的方式從1-100個(gè)細(xì)胞或10 pg-1 ng總RNA制備高品質(zhì)的全長(zhǎng)cDNA。通過整合為一步的RT和PCR反應(yīng)，在4小時(shí)內(nèi)便可獲得雙鏈cDNA??！

高靈敏度的單細(xì)胞全長(zhǎng)mRNA分析：SMART-Seq^® Single Cell Kit
SMART-Seq^® Single Cell Kit基于SMART-Seq^® 技術(shù)進(jìn)行了優(yōu)化改良，針對(duì)微量核酸樣品具有更高的靈敏度和再現(xiàn)性，適用于單細(xì)胞和細(xì)胞核的RNA-Seq分析?？梢詮囊阎哂械蚏NA含量的單細(xì)胞（例如PBMCs）直接生成高質(zhì)量的全長(zhǎng)cDNA，性能遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過許多現(xiàn)有單細(xì)胞全長(zhǎng)cDNA合成方法，例如SMART-Seq2。同時(shí)，高度靈活的工作流程可與自動(dòng)化微量移液設(shè)備兼容。

推薦閱讀：
SMART-Seq Single Cell Kit榮獲生物通2019十大創(chuàng)新產(chǎn)品大獎(jiǎng)
單細(xì)胞總RNA分析：SMART-Seq^® Stranded Kit
在單細(xì)胞水平，想要滿足編碼RNA和非編碼RNA在內(nèi)的全部轉(zhuǎn)錄組分析，SMART-Seq^® Stranded Kit是非常不錯(cuò)的選擇。它足夠靈敏，可以單細(xì)胞或微量RNA起始；它足夠準(zhǔn)確，可以保留鏈來源信息；它足夠包容，降解樣本，也能獲得很好的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序文庫！

「當(dāng)您做單細(xì)胞全基因組研究時(shí)」
單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增：PicoPLEX^® Single Cell WGA Kit v3
對(duì)于單細(xì)胞全基因組的研究，僅含有皮克級(jí)DNA的單細(xì)胞來說，量少而難以直接進(jìn)行文庫構(gòu)建。因此需要先對(duì)單細(xì)胞中的DNA進(jìn)行高質(zhì)量的擴(kuò)增。PicoPLEX^® Single Cell WGA Kit v3采用“隨機(jī)引物引發(fā)線性擴(kuò)增”+“發(fā)夾結(jié)構(gòu)”在2.5小時(shí)內(nèi)，僅需三步即可實(shí)現(xiàn)高再現(xiàn)性的全基因組擴(kuò)增。作為PicoPLEX^® WGA Kit系列中的全新一代產(chǎn)品，PicoPLEX^® WGA Kit v3進(jìn)一步優(yōu)化了DNA聚合酶、擴(kuò)增引物、操作流程，擁有更好的CNV檢測(cè)分辨率，同時(shí)具備高效的SNV檢測(cè)能力，滿足不同檢測(cè)需求。PicoPLEX^® WGA Kit系列產(chǎn)品在全球被IVF行業(yè)供應(yīng)商信賴，并用于胚胎植入前遺傳學(xué)篩查和診斷（PGS/PGD）。

流程示意圖

單細(xì)胞DNA文庫構(gòu)建：PicoPLEX^® Gold Single Cell DNA-Seq Kit
由于NGS技術(shù)的迅速發(fā)展，使得對(duì)單細(xì)胞全基因組研究更為廣泛和成熟。不過目前對(duì)于單細(xì)胞全基因組的文庫構(gòu)建，更多的方法是先進(jìn)行單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增，再進(jìn)行DNA文庫構(gòu)建兩步走的方式，整個(gè)操作復(fù)雜，稍有不慎就很可能需要重頭再來，讓人頭痛不已。PicoPLEX^® Gold Single Cell DNA-Seq Kit，這款試劑盒將單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增和DNA文庫構(gòu)建兩步整合在一起，只需四步三小時(shí)，便可完成單細(xì)胞到全基因組測(cè)序文庫的華麗變身！

「當(dāng)您做單細(xì)胞免疫組庫研究時(shí)」
目前，對(duì)T細(xì)胞受體（TCR）的常用方法是對(duì)bulk細(xì)胞的TCR CDR3區(qū)域進(jìn)行測(cè)序。而采用SMARTer^® Human scTCR a/b Profiling Kit構(gòu)建TCR文庫的優(yōu)勢(shì)在于：可以對(duì)單個(gè)T細(xì)胞進(jìn)行分析，確定T細(xì)胞群內(nèi)特定的alpha-beta 受體鏈配對(duì)信息。這也是以bulk細(xì)胞為依托的傳統(tǒng)研究手段所無法比擬的。

單細(xì)胞TCR測(cè)序

■ 怎么減少手動(dòng)操作所帶來的偏差？

Apollo^™ Library Prep System
對(duì)于操作精度要求很高的單細(xì)胞層面分析，就算采用了優(yōu)異的單細(xì)胞文庫構(gòu)建試劑，操作也很熟練，但在對(duì)多個(gè)樣本進(jìn)行同時(shí)分析時(shí)，難免會(huì)因?yàn)殚L(zhǎng)時(shí)間手動(dòng)操作所帶來的偏差，使得樣本間單細(xì)胞分析結(jié)果的準(zhǔn)確性、一致性有所折扣。為此，Takara公司推出的Apollo^™ Library Prep System，在配套了SMART-Seq v4單細(xì)胞cDNA制備Kit后，可高效、可靠、自動(dòng)化制備多達(dá)96個(gè)單細(xì)胞樣品的cDNA用于后續(xù)的NGS分析，降低了手動(dòng)操作時(shí)間，減少了實(shí)驗(yàn)誤差，獲得有效的結(jié)果。

Apollo^™ Library Prep System