| mRNA體外轉(zhuǎn)錄專用載體Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis | ||||||
| 品牌 | Code No. | 產(chǎn)品名稱 | 包裝量 | 價(jià)格（元） | 說明書 | 數(shù)量 |
| Takara | 6146 | Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis | 10 μl | ￥995 |
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| Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis用于制備Poly(A)尾區(qū)域無(wú)冗余序列的mRNA · 用于構(gòu)建mRNA體外轉(zhuǎn)錄模板質(zhì)粒的載體 · 使用IIS型限制性內(nèi)切酶BspQ I可得到Poly(A)尾區(qū)域無(wú)冗余序列的線性化模板，能夠提高mRNA的翻譯效率 · 與In-Fusion® Snap Assembly Master Mix結(jié)合使用，可輕松快速地進(jìn)行克隆 |
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| ■ 制品說明 | ||||
| Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis是用于使用TriLink 公 司 的 帽 類 似 物 [CleanCap Reagent AG 或 CleanCap Reactive AG（3’OMe）]構(gòu)建體外轉(zhuǎn)錄 (IVT)mRNA的模板質(zhì)粒。線性化的載體中包含T7啟動(dòng)子、轉(zhuǎn)錄起始序列（AGG）、5’-UTR(untranslated region)和3’-UTR、Poly(A)序列（141堿基），因此只需要對(duì)目標(biāo)基因編碼序列（Coding sequence: CDS）進(jìn)行In-Fusion無(wú)縫克隆，便可構(gòu)建體外轉(zhuǎn)錄的模板質(zhì)粒（圖1）。隨后用IIS型限制酶BspQ I消化，得到的線性化質(zhì)粒模板用于合成Poly(A)尾無(wú)冗余序列的mRNA（圖2），獲得的mRNA可用于人類、小鼠或其他哺乳動(dòng)物細(xì)胞。使用線性化的模板質(zhì)粒，通過Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit（Code No. 6144）進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄（IVT），即可便捷地制備高產(chǎn)量的mRNA。 關(guān)于模板質(zhì)粒的設(shè)計(jì)和方案的細(xì)節(jié)，請(qǐng)結(jié)合本產(chǎn)品的數(shù)據(jù)，參考Cloning Kit for mRNA Template(Code No. 6143)的使用說明書。 |
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| 圖2：Linearized Template Vector (BspQ I)的BspQ I酶切位點(diǎn)周圍序列、線性化后的末端結(jié)構(gòu)和IVT RNA序列圖像 Type IIS限制酶BspQ I的識(shí)別序列(紅框)和切割位點(diǎn)(藍(lán)箭頭)。切割位點(diǎn)位于識(shí)別序列的外側(cè)。 通過在BspQ I處進(jìn)行切割，可以制備Poly(A)尾區(qū)域無(wú)冗余序列的mRNA合成模板。 |
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| ■ 用途 | ||||
| 制備Poly(A)尾區(qū)域無(wú)冗余序列的mRNA合成模板 |
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| ■ 制品內(nèi)容 | ||||
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| ■ 使用注意 | ||||
| · 構(gòu)建質(zhì)粒模板時(shí)，需要In-Fusion無(wú)縫克隆試劑。請(qǐng)購(gòu)買In-Fusion Snap Assembly Master Mix（Code No. 638943/638944/638947～638949）。 · 關(guān)于模板質(zhì)粒的設(shè)計(jì)和方案細(xì)節(jié)，請(qǐng)參閱Cloning Kit for mRNA Template (Code No. 6143)的使用說明書。此時(shí)，請(qǐng)確認(rèn)想要克隆的目標(biāo)基因的CDS序列中不存在BspQ I位點(diǎn)。若出現(xiàn)BspQ I位點(diǎn)存在于CDS中的情況，為確保氨基酸序列不會(huì)發(fā)生變化，可以通過使用不同的密碼子（例：從丙氨酸密碼子的“GCU”變?yōu)椤癎CC”等）來(lái)改變DNA序列。 · 當(dāng)dsDNA模板、試劑、試管或微量移液器槍頭被RNase污染時(shí)，合成的RNA產(chǎn)量會(huì)降低或者出現(xiàn)片段化。在實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)采取預(yù)防措施以避免RNase污染，例如戴一次性手套和使用專門用于RNA實(shí)驗(yàn)的試管和微量移液器槍頭。 |
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| ■ 保存 | ||||
| -20℃ |
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| ■ 試劑盒以外的其它必要試劑（主要試劑） | ||||
| · In-Fusion Snap Assembly Master Mix（Code No. 638943/638944/638947～638949） · 感受態(tài)細(xì)胞 E. coli HST08 Premium Competent Cells（Code No. 9128） Takara Stable Competent Cells（Code No. 9132）等 · SOC培養(yǎng)基 · LB (luria bertani)培養(yǎng)基 · LB /卡那霉素(50 μg/ml)平板 |
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| ■ 序列信息 | ||||
| · Linearized Template Vector (BspQ I) ：2,962 bp 序列信息（fasta格式）：點(diǎn)此進(jìn)行下載 |
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| · FLuc Control Fragment (BspQ I) ：1,683 bp 序列信息（fasta格式）：點(diǎn)此進(jìn)行下載 |
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| ■ 載體信息Linearized Template Vector (BspQ I) | ||||
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| NeoR/KanR: 53～847 Ori: 1,172～1,760 CMV enhancer: 1,861～2,240 CMV promoter: 2,241～2,444 |
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| T7 promoter sequence: 2,489～2,505 Transcription start sequence (AGG): 2,506～2,508 5’UTR: 2,509～2,559 Upstream In-Fusion region (15 bp): 2,545～2,559 |
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| In-Fusion cloning site (linearized site): between 2,559 and 2,560 | ||||
| Downstream In-Fusion region (15 bp): 2,560～2,574 3’UTR: 2,560～2,672 Poly(A)141 : 2,673～2,813 BspQI: 2,810 |
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| Poly(A) Forward Primer: 2,570～2,589 Poly(A) Reverse Primer: 2,904～2,923 |
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| <T7啟動(dòng)子序列后的詳細(xì)信息> | ||||
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頁(yè)面更新：2024-03-21 09:40:52
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