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機(jī)構(gòu)用戶解決方案

產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

無標(biāo)題文檔
mRNA疫苗研究解決方案
 
新冠疫情的出現(xiàn)讓疫苗再次備受關(guān)注。作為“疫苗軍團(tuán)”中的一員，mRNA疫苗作為后起之秀熱度不斷攀升。
體外轉(zhuǎn)錄的mRNA應(yīng)用在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的首次報(bào)道是在1990年，研究人員將報(bào)告基因的mRNA注射入小鼠骨骼肌，并成功檢測到蛋白質(zhì)的表達(dá)。然而，由于這一時(shí)期缺少高效的mRNA遞送技術(shù)，加之RNA本身的不穩(wěn)定性等原因，在這一階段的研究過后，mRNA療法并沒有走上快速發(fā)展的道路。隨著相關(guān)研究的不斷投入，近年來涌現(xiàn)的各種創(chuàng)新型技術(shù)讓mRNA在疫苗研發(fā)領(lǐng)域嶄露頭角，表現(xiàn)出很好的前景。
相比滅活疫苗等前代技術(shù)平臺，mRNA技術(shù)在安全性、功效表現(xiàn)，以及生產(chǎn)上均具有一定優(yōu)勢。mRNA不具備感染性、整合性，降低了發(fā)生感染或插入突變帶來的潛在風(fēng)險(xiǎn)。各種修飾技術(shù)幫助mRNA提高了穩(wěn)定性與可翻譯性，新的遞送方法讓mRNA可以快速進(jìn)入到細(xì)胞中完成表達(dá)。此外這些新技術(shù)新方法也為其安全性提供了進(jìn)一步保障。通過體外轉(zhuǎn)錄技術(shù)，mRNA可以被快速、大量地合成，讓mRNA也同時(shí)具備了生產(chǎn)優(yōu)勢。
 
Takara mRNA疫苗研究方案，為mRNA疫苗不同階段研究提供豐富的研發(fā)工具，助力疫苗研究工作提質(zhì)增效。
 
mRNA體外合成相關(guān)產(chǎn)品一覽
 
mRNA體外合成

生產(chǎn)mRNA主要通過體外合成方式進(jìn)行，體系中RNA聚合酶以DNA為模板體外轉(zhuǎn)錄得到mRNA。Takara提供多種mRNA合成工具酶及相關(guān)試劑，包括各種聚合酶、修飾酶及系統(tǒng)化合成工具。
 
Takara IVTpro™ 高質(zhì)量、高產(chǎn)量mRNA體外轉(zhuǎn)錄試劑盒
貨號 產(chǎn)品名稱 規(guī)格
6141 Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System 1 Kit
6143 Cloning Kit for mRNA Template 10 Rxns
6144 Takara IVTpro™ T7 mRNA Synthesis Kit 20 Rxns
6146 Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis 10 μl
 
Cloning Kit for mRNA Template（6143）為用戶提供預(yù)線性化的DNA模板制備載體，已包含T7啟動(dòng)子、轉(zhuǎn)錄起始序列（AGG）、5’－UTR、3’－UTR以及105-base Poly(A)序列。Cloning Kit整合了Takara In-Fuison®無縫克隆技術(shù)，高效快速地幫助用戶完成mRNA體外轉(zhuǎn)錄所需的DNA模板制備工作。
Takara IVTpro™ T7 mRNA Synthesis Kit（6144）為用戶提供了mRNA體外合成所需的體系組分，包括Takara最新推出的T7 RNA聚合酶 — T7 RNA Polymerase ver.2.0（2541A），以及反應(yīng)后消化模板所需的DNaseⅠ、純化mRNA所需的LiCl溶液。另外，獨(dú)立包裝的NTPs便于修飾NTPs替換。本品配合CleanCap Reagent AG（TriLink公司的5’帽類似物），可高效制備含5’帽子結(jié)構(gòu)的mRNA。每次反應(yīng)（20 μl體系）可合成高達(dá)200 μg或更多mRNA?！?’帽類似物不包含在本產(chǎn)品中。
Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System（6141）包含Cloning Kit for mRNA Template（6143）和Takara IVTpro™ T7 mRNA Synthesis Kit（6144）各一個(gè)。
Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis（6146）為預(yù)線性化的帶有BspQ I酶切位點(diǎn)的DNA模板質(zhì)粒。已包含T7啟動(dòng)子、轉(zhuǎn)錄起始序列（AGG）、5’-UTR、 3’-UTR、以及105-base Poly(A)序列。配合Takara In-Fusion® Snap Assembly Master Mix（638947），能高效快速地幫助用戶完成mRNA體外轉(zhuǎn)錄所需的DNA模板制備工作。使用IIS型限制酶BspQ I（1227A）消化，可得到Poly(A)尾無冗余序列的mRNA線性化質(zhì)粒模板，提高mRNA的翻譯效率。搭配Takara IVTpro™ T7 mRNA Synthesis Kit（6144）即可進(jìn)行mRNA的體外合成。
 

貨號 產(chǎn)品名稱 規(guī)格
2460A Vaccinia Capping Enzyme 500 U
2460B Vaccinia Capping Enzyme 2,000 U
2470A mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase 2,500 U
2470B mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase 10,000 U
2540A T7 RNA Polymerase 5,000 U
2540B T7 RNA Polymerase 5,000 U ×5
2541A T7 RNA Polymerase ver.2.0 20,000 U
2542A T7 RNA Polymerase, HQ 200,000 U
2560A PrimeCap™ T7 RNA Polymerase (low dsRNA)（單酶） 20,000 U
2520A SP6 RNA Polymerase 3,000 U
2520B SP6 RNA Polymerase 3,000 U ×5
2181 Poly(A) Polymerase 20 U
2450A Pyrophosphatase (inorganic) 10 U
2450B Pyrophosphatase (inorganic) 10 U ×5
2451A Pyrophosphatase (inorganic), HQ 1,000 U
2270A Recombinant DNase I (RNase-free) 1,000 U
2270B Recombinant DNase I (RNase-free) 1,000 U ×5
2313A Recombinant RNase Inhibitor 5,000 U
2313B Recombinant RNase Inhibitor 5,000 U ×5
2315A Recombinant RNase Inhibitor ver.2.0 5,000 U
2315B Recombinant RNase Inhibitor ver.2.0 5,000 U ×5
1227A BspQ I 500 U
1227B BspQ I 500 U ×5
1228A BspQ I，HQ 20,000 U
1093A XbaⅠ 3,000 U ×5
1093AH XbaⅠ，高濃度 3,000 U
 
點(diǎn)擊下方鏈接查看豐富的限制性內(nèi)切酶系列產(chǎn)品：
常規(guī)限制酶系列產(chǎn)品、QuickCut限制酶產(chǎn)品
 
mRNA轉(zhuǎn)染
進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前，將mRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞是初步驗(yàn)證所合成的mRNA是否有效的方法之一。Takara Xfect RNA轉(zhuǎn)染試劑可以高效轉(zhuǎn)染多種類型RNA至哺乳動(dòng)物細(xì)胞，是包含轉(zhuǎn)染所需全部試劑的完整系統(tǒng)。
 
貨號 產(chǎn)品名稱 規(guī)格
631450 Xfect RNA Transfection Reagent 1.2 ml
 
Xfect是可生物降解的納米顆粒高分子聚合物轉(zhuǎn)染試劑，可提供更低的細(xì)胞毒性和高轉(zhuǎn)染效率，適用于廣泛的細(xì)胞類型，保證高轉(zhuǎn)染效率的同時(shí)保持了更高的細(xì)胞活性。
 
實(shí)驗(yàn)例
圖1. HeLa細(xì)胞與間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）轉(zhuǎn)染GFP mRNA。HeLa細(xì)胞（2.0×105）和間充質(zhì)干細(xì)胞（6.0×104）使用1 μg GFP mRNA和5 μl Xfect RNA轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行處理。20小時(shí)后，通過落射熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。HeLa細(xì)胞圖像20倍放大，間充質(zhì)干細(xì)胞圖像40倍放大。
 
轉(zhuǎn)染細(xì)胞中目標(biāo)蛋白表達(dá)檢測（Western Blot分析）
Western Blot分析仍然是目前實(shí)驗(yàn)室常用的檢測分析方法之一，廣泛應(yīng)用于對目標(biāo)蛋白質(zhì)的檢測與分析。轉(zhuǎn)染細(xì)胞后的mRNA會獲得怎樣的表達(dá)情況，通過Western Blot檢測可以獲得一目了然的結(jié)果。Takara提供豐富的Western Blot實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑，搭配詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)操作指南，提高Western Blot實(shí)驗(yàn)效率。
 
化學(xué)發(fā)光檢出用HPR底物
貨號 產(chǎn)品名稱 規(guī)格
T7101A Western BLoT Chemiluminescence HRP Substrate 250 ml
T7101B Western BLoT Chemiluminescence HRP Substrate 250 ml × 2
T7102A Western BLoT Quant HRP Substrate 100 ml
 
抗原-抗體反應(yīng)促進(jìn)
貨號 產(chǎn)品名稱 規(guī)格
T7111A Western BLoT Immuno Booster 250 ml each
T7115A Western BLoT Immuno Booster PF 250 ml
 
HPR標(biāo)識二抗替代
貨號 產(chǎn)品名稱 規(guī)格
T7122A Western BLoT Rapid Detect v2.0 50 Rxns
 
封閉與洗脫
貨號 產(chǎn)品名稱 規(guī)格
T7131A Western BLoT Blocking Buffer（Fish Gelatin） 1 L
T7132A Western BLoT Blocking Buffer（Protein Free） 500 ml
T7135A Western BLoT Stripping Buffer 500 ml
 
電泳緩沖液方便裝與蛋白質(zhì)Marker
貨號 產(chǎn)品名稱 規(guī)格
3453A CLEARLY Protein Ladder (Unstained) 500 μl
3454A CLEARLY Stained Protein Ladder 500 μl
T9320A TaKaRa CBB Protein Safe Stain 1 L
 
Western Blot實(shí)驗(yàn)操作指南
 
病毒RNA檢測
 
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是檢驗(yàn)疫苗效果的重要一環(huán)。這其中少不了對不同實(shí)驗(yàn)組別動(dòng)物體內(nèi)病毒載量的檢測。除了經(jīng)典的組織病理學(xué)、免疫組化方法外，快速、靈敏的熒光定量PCR方法同樣不可少。Takara提供高質(zhì)量的病毒核酸檢測相關(guān)產(chǎn)品，加速研究進(jìn)程。
 
探針法一步RT-PCR試劑與病毒核酸提取
貨號 產(chǎn)品名稱 規(guī)格
RR064A One Step PrimeScript™ RT-PCR Kit (Perfect Real Time) 100 Rxns
RR064B One Step PrimeScript™ RT-PCR Kit (Perfect Real Time) 100 Rxns × 5
RR600A One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix 200 Rxns
RR600B One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix 200 Rxns × 5
9766 TaKaRa MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.5.0 50 Rxns
 
【文獻(xiàn)案例】
· Huang, Qingrui, et al. “A Single-Dose MRNA Vaccine Provides a Long-Term Protection for HACE2 Transgenic Mice from SARS-CoV-2.” Nature Communications, vol. 12, no. 1, 2021, pp. 776–776.
· Zhang, Na Na, et al. “A Thermostable MRNA Vaccine against COVID-19.” Cell, vol. 182, no. 5, 2020, pp. 1271–1283.
· Zhang, Cheng, et al. “Impact of Prior Infection on Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2 Transmission in Syrian Hamsters.” Frontiers in Microbiology, vol. 12, 2021, pp. 722178–722178.
 
疫苗的研發(fā)是一場與病毒的賽跑?？萍疾粩喟l(fā)展，技術(shù)不斷進(jìn)步，人類的腳步從未停止向前。mRNA疫苗以及更多基于mRNA技術(shù)的治療方法將為人類的健康以及公共衛(wèi)生安全事業(yè)持續(xù)貢獻(xiàn)力量
 
Takara為不同基因工程疫苗研究提供多種解決方案，點(diǎn)擊下方專題，了解更多信息。
《重組腺病毒疫苗研究解決方案》
《重組蛋白疫苗研究解決方案》
 
參考文獻(xiàn)
· Wolff, Jon A., et al. “Direct Gene Transfer into Mouse Muscle in Vivo.” Science, vol. 247, no. 4949, 1990, pp. 1465–1413.
· Pardi, Norbert, et al. “mRNA Vaccines — a New Era in Vaccinology.” Nature Reviews Drug Discovery, vol. 17, no. 4, 2018, pp. 261–279.
· Karikó, Katalin, et al. “Incorporation of Pseudouridine into mRNA Yields Superior Nonimmunogenic Vector with Increased Translational Capacity and Biological Stability.” Molecular Therapy, vol. 16, no. 11, 2008, pp. 1833–1840.
· Kauffman, Kevin J., et al. “Materials for Non-Viral Intracellular Delivery of Messenger RNA Therapeutics.” Journal of Controlled Release, vol. 240, 2016, pp. 227–234.
· Guan, S., and J. Rosenecker. “Nanotechnologies in Delivery of mRNA Therapeutics Using Nonviral Vector-Based Delivery Systems.” Gene Therapy, vol. 24, no. 3, 2017, pp. 133–143.
· Thess, Andreas, et al. “Sequence-Engineered mRNA Without Chemical Nucleoside Modifications Enables an Effective Protein Therapy in Large Animals.” Molecular Therapy, vol. 23, no. 9, 2015, pp. 1456–1464.
· Karikó, Katalin, et al. “Generating the Optimal mRNA for Therapy: HPLC Purification Eliminates Immune Activation and Improves Translation of Nucleoside-Modified, Protein-Encoding mRNA.” Nucleic Acids Research, vol. 39, no. 21, 2011.
 

頁面更新：2024-04-29 14:50:43