| Cellartis®干細胞研究用系列產(chǎn)品介紹之 DEF-CS：單個干細胞基因操作實驗的理想選擇 |
| 1. 單個干細胞基因操作的必要性 |
| TALEN和Crispr-Cas9這些新方法的出現(xiàn)，使得對于細胞某個核酸區(qū)域可以進行相當(dāng)準(zhǔn)確的靶向攻擊。但是，到目前為止，這些方法還不能做到把目標(biāo)核酸位點進行劇本式的改造。通常，都是在基因操作后，對于得到的細胞進行目標(biāo)核酸測序，寄希望于在這些候選的克隆中（clones）篩選得到理想的基因改造結(jié)果。 設(shè)想一個例子，假設(shè)某研究團隊想研究某個調(diào)控基因的啟動子區(qū)域是如何參與基因調(diào)控的。他們利用Crispr-Cas9定點地攻擊這個目標(biāo)啟動子。根據(jù)Crispr-Cas9的特點，在某一次這種定點攻擊后，核酸傷口（DNA lesion）通過修復(fù)機制可以愈合，而愈合的過程會造成許多不同的后果，可能是增加了新的堿基，可能是減少了堿基，可能是堿基替換。對于研究團隊來講，他們希望獲得盡可能多樣化的愈合結(jié)果，這樣才能在后期的分析中，獲得在啟動子中哪個或是哪些堿基是起作用的。 |
| 2. 單個干細胞基因操作的困難 |
| 目前，單個干細胞基因操作存在的巨大挑戰(zhàn)發(fā)生在基因操作后的細胞恢復(fù)過程。干細胞在基因操作過程中，需要經(jīng)歷幾個如轉(zhuǎn)染、電擊等破壞性過程，這對細胞活性是個挑戰(zhàn)。更為重要的是，目前市面上主流的干細胞培養(yǎng)基里面，干細胞是貼壁、成集落式的生長。這就是說，一般地，干細胞的生長是一個群體性過程，細胞和細胞之間的交互是個重要的因素。那么，在干細胞進行基因操作后，需要以單細胞懸液和單細胞鋪板的形式進行細胞恢復(fù)，這會對于干細胞的恢復(fù)生長造成非常大的負面影響。 因此，DEF-CS是單個干細胞基因操作的理想選擇。和目前市場上知名的Life Technologies和STEMCELL Technologies 的相關(guān)產(chǎn)品不同的是，DEF-CS在設(shè)計上就是支持單細胞生長的，如下圖所示，干細胞在DEF-CS培養(yǎng)基里的生長方式是貼壁、單細胞平層生長；而在mTeSR 1培養(yǎng)基 (STEMCELL Technologies)和 Essential 8培養(yǎng)基 (E8; Life Technologies)中，細胞是貼壁、成聚落（即非單細胞平層）式生長。 |
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| *實驗結(jié)果來源于clontech網(wǎng)站 |
| http://www.clontech.com/CN/Products/Stem_Cell_Research/Culture_and_Cryopreservation/xxclt_ displayImage.jsp?img CntId=109300&sitex=10022:22372:US |
| 3. 在維持單個干細胞活性方面，DEF-CS有顯著優(yōu)勢 |
| 下圖展示的實驗結(jié)果說明，DEF-CS在維持單個細胞的恢復(fù)性生長方面有質(zhì)的優(yōu)勢。圖中橫坐標(biāo)軸代表加到培養(yǎng)孔（well）中干細胞懸液內(nèi)所包含的干細胞數(shù)，依次是444.4個/well, 148.1個/well, 49.4個/well, 16.5個/well, 5.5個/well, 1.8個/well, 1.0個/well, 0.5個/well；縱坐標(biāo)代表每個孔中經(jīng)過細胞恢復(fù)后，形成了健康的貼壁生長細胞的百分比。在懸液包含444.4個/well的情況時，假如一共添加了100個well, 其中全部的well中出現(xiàn)了健康的細胞恢復(fù)生長，形成的有效克隆率是100%；當(dāng)懸液中的細胞含量大于1.8個/well時，DEF-CS與Vendor1相比，形成的有效克隆率基本一致，但是，當(dāng)懸液中的細胞數(shù)為1個或0.5個時，DEF-CS的效率明顯高于其他的競爭產(chǎn)品。這說明，DEF-CS在維持單個干細胞的活性方面，與目前市面上的產(chǎn)品比起來，有顯著優(yōu)勢。 |
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| *實驗結(jié)果來源于clontech網(wǎng)站 |
| http://www.clontech.com/US/Products/Stem_Cell_Research/Resources/Technical_Notes/DEF-CS_Single-Cell_Cloning |
| 4. 采用DEF-CS進行單個干細胞傳代操作后，干細胞全能性保持上有顯著優(yōu)勢 |
| 做單個干細胞基因操作的研究人員，除了關(guān)心單個干細胞的存活率以外，還需確保存活下來的單個干細胞仍然保留著發(fā)育全能性。 下面的實驗結(jié)果說明，DEF-CS培養(yǎng)體系在這點上，具有很大優(yōu)勢。下圖是流式細胞儀的測試結(jié)果，人類誘導(dǎo)多能干細胞株chiPSC22分別使用DEF-CS，vendor1，vendor2培養(yǎng)基，進行單個細胞恢復(fù)實驗（即懸液中只包含1個干細胞），挑選出五個可以恢復(fù)生長的克隆來。對于每個恢復(fù)的克隆，用兩種標(biāo)記干細胞全能性的特異性抗體同時進行檢測，第一種是TRA-1-60(藍色)，第二種是SSEA-4（粉色），綠色表示可同時檢測出這兩種抗體。觀察chiPSC22的生長情況，發(fā)現(xiàn)vendor2產(chǎn)品培養(yǎng)體系中挑選不到恢復(fù)的克隆，而在DEF-CS培養(yǎng)體系中挑出的5個克隆，雙標(biāo)記同時檢測出的都接近100%，細胞性表現(xiàn)良好的全能性；vendor1產(chǎn)品培養(yǎng)體系中挑出了5個克隆，而陽性率最高達到50%，由此能說明DEF-CS培養(yǎng)體系中恢復(fù)的單個干細胞克隆，可以很好地保持干細胞的全能性。 |
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| *實驗結(jié)果來源于clontech網(wǎng)站 |
| http://www.clontech.com/US/Products/Stem_Cell_Research/Resources/Technical_Notes/DEF-CS_Single-Cell_Cloning |
| RHB-A產(chǎn)品信息： |
| http://grayarearadio.com/ProductShow.aspx?from=m&m=20160307140053500605&productID=20160307150054903637 |
| DEF-CS產(chǎn)品信息： |
| http://grayarearadio.com/ProductShow.aspx?from=m&m=20160307140053500605&productID=20160307140359660608 |
頁面更新：2017-04-14 14:05:23
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