| 熱點(diǎn)關(guān)注 | Takara 高效基因改造解決方案助力T細(xì)胞研究 |
| 腫瘤，在這個(gè)信息化時(shí)代，相信我們每個(gè)人都不陌生。 腫瘤已成為目前嚴(yán)重威脅人類健康的疾病。根據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥負(fù)擔(dān)數(shù)據(jù)，2020年全球新發(fā)癌癥病例1929萬例，其中中國新發(fā)癌癥457萬人，占全球的23.7%。全球癌癥死亡病例996萬例，其中中國癌癥死亡人數(shù)300萬，占癌癥死亡總?cè)藬?shù)30%。我國已經(jīng)成為癌癥發(fā)病和死亡的大國。 |
| 慶幸，我們生活在一個(gè)生命科學(xué)高速蓬勃發(fā)展的時(shí)代。 |
| 縱使戰(zhàn)勝腫瘤還有很遠(yuǎn)的路要走，但是人們攻克腫瘤的腳步卻從未停歇。近年來，腫瘤免疫治療備受關(guān)注，尤其使用轉(zhuǎn)基因T細(xì)胞（T淋巴細(xì)胞）來靶向治療腫瘤是一種很有前景的方法，特別是對(duì)于難以使用傳統(tǒng)方法來治療的腫瘤。在T細(xì)胞治療中最為常見的兩種方法圍繞著在基因工程T細(xì)胞中引入新的T細(xì)胞受體（TCR）或嵌合抗原受體（CAR）（Humphries 2013）來開展，也就是TCR-T療法和CAR-T療法。 |
| 重磅，2021年兩款CAR-T療法相繼在中國獲得國家藥品監(jiān)督管理局（NMPA）批準(zhǔn)上市，分別是復(fù)星凱特公司的Yescarta和藥明巨諾的Relma-cel，為治療大B 細(xì)胞淋巴瘤提供了新選擇。到目前為止，全球已有6款CAR-T療法獲批上市。 |
| 持續(xù)發(fā)力，CAR-T療法在血液瘤治療領(lǐng)域大顯身手，效果卓著；與CAR-T療法同樣備受關(guān)注的TCR-T療法，雖然目前仍處在試驗(yàn)階段，國內(nèi)外尚未有相關(guān)產(chǎn)品上市。然而，TCR-T療法在實(shí)體瘤的治療方面已經(jīng)展示了良好的安全性和有效性，是目前更有可能在實(shí)體瘤取得突破進(jìn)展的T細(xì)胞免疫療法。 |
| siTCR™載體技術(shù)是Takara Bio開發(fā)的一種T細(xì)胞改造方法。這項(xiàng)siTCR™ 載體技術(shù)可以更大限度減少內(nèi)源性TCR的參與，獲得更多表達(dá)外源性TCR的T淋巴細(xì)胞。這項(xiàng)技術(shù)的應(yīng)用被認(rèn)為可以降低所回輸?shù)幕蚬こ蘐細(xì)胞的副作用風(fēng)險(xiǎn)，提高療效。 |
| 多年來，Takara Bio一直致力于siTCR™基因療法的開發(fā)。Takara Bio與大冢制藥株式會(huì)社合作，正在日本進(jìn)行一項(xiàng)針對(duì)滑膜肉瘤的NY-ESO-1 siTCR™ 基因療法的I/II期臨床試驗(yàn)。與此同時(shí)，Takara Bio目前還與日本三重大學(xué)和加拿大瑪格麗特公主癌癥中心合作推動(dòng)siTCR™ 基因療法的臨床發(fā)展。MAGE-A4抗原特異性siTCR™ 療法I期臨床試驗(yàn)(研究者發(fā)起的試驗(yàn))正在進(jìn)行中，這種療法主要針對(duì)食管瘤等實(shí)體瘤的治療。此外，研究者發(fā)起的針對(duì)實(shí)體瘤的NY-ESO-1 siTCR™ 基因療法臨床試驗(yàn)正在加拿大進(jìn)行。 |
| T細(xì)胞免疫治療研究未來可期，CAR-T療法在國內(nèi)的獲批上市，讓大家對(duì)T細(xì)胞免疫治療有了更高更長遠(yuǎn)的期待，希望將來有更多的療法上市，惠及更多患者。在TCR-T療法和CAR-T療法中，TCR-T和CAR-T細(xì)胞制備是核心也是關(guān)鍵，因此T細(xì)胞高效基因改造環(huán)節(jié)值得關(guān)注。 |
| 在T細(xì)胞改造方面，我們可以為您提供較為完善的解決方案，助力T細(xì)胞治療研究。 |
 |
| ★ TCR/scFv高效調(diào)取 |
| SMARTer RACE 5’/3’Kit使用SMARTer技術(shù)進(jìn)行RACE （Rapid amplification of cDNA ends），無需接頭連接即可合成cDNA。 |
| 所合成的cDNA可直接用于5’ RACE PCR或者3’ RACE PCR，因此抗體可變區(qū)等可通過簡便的操作流程來進(jìn)行克隆。該方法已在T細(xì)胞治療中有所應(yīng)用，并且在T細(xì)胞/B細(xì)胞相關(guān)研究中的使用頻率也越來越高。 |
| ★ CAR/TCR載體輕松構(gòu)建 |
| In-Fusion HD Cloning Plus技術(shù)通過加速抗原及CAR載體的構(gòu)建，加速了T細(xì)胞基因改造流程。In-Fusion HD克?。嚎焖?(15 min), 高效(克隆效率>95%), 無序列依賴 (任何PCR插入片段都可以克隆到任意載體的任意位點(diǎn)), 無縫(靶標(biāo)抗體不會(huì)加入任何額外堿基對(duì)或者氨基酸), 定向, 高通量(HTP)。 |
| 由于高克隆效率和高準(zhǔn)確度，多項(xiàng)研究中使用In-Fusion HD克隆技術(shù)進(jìn)行抗體片段高通量克隆(Spidel et al. 2016; Chen et al. 2014; Meng et al. 2015)。 |
| ★ 慢病毒成功轉(zhuǎn)導(dǎo) |
| 如大家所知，慢病毒載體是目前過繼性T細(xì)胞治療研究中所使用的主要基因?qū)肫脚_(tái)。為了將TCR/CAR基因有效引入T淋巴細(xì)胞中，高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率是至關(guān)重要的。然而，典型的低轉(zhuǎn)導(dǎo)效率和T細(xì)胞擴(kuò)增速率一直都是大難題。 |
| 高病毒滴度無疑是獲得高基因?qū)胄实拈_端。 目前市面上主要是第三代和第四代慢病毒包裝系統(tǒng)。我們的第四代慢病毒包裝系統(tǒng)很有技術(shù)亮點(diǎn)。這款包裝系統(tǒng)Tet-Off和Tat反式激活因子驅(qū)動(dòng)病毒必需成分高水平表達(dá)，誘導(dǎo)級(jí)聯(lián)表達(dá)反應(yīng)，從而可以制備出高滴度慢病毒，VSV-G型包裝系統(tǒng)病毒滴度可達(dá)到107-108 IFU/ml。另外，pol基因與vpr基因的融合可以確保反轉(zhuǎn)錄酶/整合酶蛋白質(zhì)能夠轉(zhuǎn)運(yùn)到重組慢病毒顆粒中。而在第三代慢病毒包裝系統(tǒng)中，通常gag和pol序列是不分離的，也沒有使用反式激活級(jí)聯(lián)機(jī)制。這款包裝系統(tǒng)采用了預(yù)混凍干粉形式，使用方便，還在很大程度上可降低操作誤差。 |
| 合適且穩(wěn)定的病毒滴度是慢病毒成功轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵因素。 成功制備出重組慢病毒后，了解所制備病毒液中的病毒粒子數(shù)或者感染單位，無疑是很重要的，因?yàn)樗诤艽蟪潭壬蠜Q定了靶細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)效率（也就是有多少病毒進(jìn)入同一個(gè)細(xì)胞），從而決定了轉(zhuǎn)導(dǎo)靶細(xì)胞中整合的基因拷貝數(shù)。Lenti-X p24 Rapid Titer Kit基于ELISA方法而開發(fā)，特異性檢測慢病毒上清液中的p24衣殼蛋白質(zhì)，快速測定慢病毒滴度。這是目前廣受歡迎的一種慢病毒滴度測定方法。Lenti-X GoStix Plus以智能手機(jī)作為數(shù)據(jù)讀取和分析工具，在10分鐘內(nèi)定量測定重組慢病毒滴度，而不需要購買檢測儀器，是一種更快速更智能化的測定方案。 |
| 實(shí)現(xiàn)高基因?qū)胄?，更高的T細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)效率至關(guān)重要。 RetroNectin是一種重組人纖維連接蛋白片段，它不僅可以用于增強(qiáng)病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)，還對(duì)幼稚T細(xì)胞群有擴(kuò)增作用，而且與常用的轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑（比如聚凝胺和魚精蛋白）相比，對(duì)細(xì)胞的毒性更低。在經(jīng)RetroNectin包被的培養(yǎng)容器表面，細(xì)胞與慢病毒或者逆轉(zhuǎn)錄病毒以高濃度共存，可以將轉(zhuǎn)導(dǎo)效率提高30%-70%。另外RetroNectin 還可以刺激淋巴細(xì)胞，使其獲得上千倍的增殖。Takara Bio已向美國FDA提交了RetroNectin GMP級(jí)試劑的藥品主文件（DMF application number 18898），并擁有RetroNectin技術(shù)的全球獨(dú)家使用權(quán)。這款試劑已在全球44個(gè)機(jī)構(gòu)中用于超過68種基因治療臨床試驗(yàn)方案。 |
 |
| ★ CRISPR/Cas9基因編輯 |
| 除了慢病毒載體外，CRISPR/Cas9基因組編輯技術(shù)作為一種非病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)方式，在T細(xì)胞治療研究中也展現(xiàn)出巨大潛力。早在2018年《Nature》雜志上發(fā)表了一項(xiàng)突破性的研究，Alexander Marson教授和他的同事描述了一種高效的T細(xì)胞改造方法，通過共電轉(zhuǎn)的方式將Cas9-gRNA核糖核蛋白（RNP）復(fù)合物與雙鏈DNA或單鏈DNA HDR模板共同導(dǎo)入至細(xì)胞中，可以繞過病毒傳遞的方式，最大限度地降低細(xì)胞毒性。利用這一方法，作者迅速糾正了T細(xì)胞中自體免疫相關(guān)的遺傳突變，這些T細(xì)胞來自于患有罕見的單基因遺傳病的同胞；同時(shí)通過這一方法對(duì)來源于健康供體的T細(xì)胞進(jìn)行了重編程，經(jīng)過重編程的T細(xì)胞在體外和體內(nèi)模型中都成功地靶向了癌細(xì)胞。 |
| 我們可以提供常規(guī)研究級(jí)別和GMP級(jí)別的無標(biāo)簽重組Cas9蛋白質(zhì)。GMP級(jí)別的重組Cas9蛋白質(zhì)，不含人源或動(dòng)物源成分，它的溶液成分經(jīng)過了優(yōu)化，對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞具有良好的耐受性，可降低導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞時(shí)所造成的細(xì)胞損傷。 |
| ★ T細(xì)胞受體NGS分析 |
| 免疫基因組學(xué)應(yīng)用于癌癥研究的一個(gè)挑戰(zhàn)就是在癌癥患者接受免疫治療之前和之后，確定T細(xì)胞庫并鑒定腫瘤反應(yīng)性T細(xì)胞克隆 (Liu et al. 2017)。SMARTer immune profiling kits利用SMART技術(shù)和基于5'-RACE的方法來捕獲TCR轉(zhuǎn)錄本完整V(D)J可變區(qū)，提供批量細(xì)胞、高通量單細(xì)胞等多種T細(xì)胞受體的NGS分析解決方案。 |
| ★ 細(xì)胞因子快速定量 |
| T細(xì)胞在轉(zhuǎn)導(dǎo)時(shí)的活化狀態(tài)是病毒載體對(duì)T細(xì)胞有效修飾的決定因素之一。目前已經(jīng)開發(fā)出多種T細(xì)胞活化方法，而在開發(fā)T細(xì)胞活化方法的過程中，一個(gè)共同的實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)是對(duì)不同的T細(xì)胞亞型進(jìn)行分析，以評(píng)估各種活化方法的影響和T細(xì)胞反應(yīng)的程度。這些分析通常通過ELISA和微珠或玻璃陣列這樣的免疫檢測方法來測定分泌的細(xì)胞因子，但這些方法較為耗費(fèi)時(shí)間、成本和人力。相比之下，GoStix Plus檢測能夠在約10分鐘內(nèi)對(duì)細(xì)胞因子進(jìn)行定量測定，可在短時(shí)間內(nèi)提供與ELISA檢測相當(dāng)?shù)脑佻F(xiàn)性。 |
| 對(duì)使用抗CD3/CD28包被珠或抗CD3/CD28四聚體復(fù)合物，或使用植物血凝素（PHA）活化的T細(xì)胞，分別使用GoStix Plus和相應(yīng)ELISA試劑盒測定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的人細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2。測定結(jié)果表明，使用GoStix Plus花費(fèi)10分鐘測定的細(xì)胞因子譜，與使用相應(yīng)ELISA方法獲得的結(jié)果相當(dāng)，所揭示的不同T細(xì)胞活化方法之間的差異是相同的，但花費(fèi)的時(shí)間卻非常短。 |
 |
| (數(shù)據(jù)來源于Takara Bio USA, Inc.) |
| 作為一種比傳統(tǒng)ELISA更快、更簡單的替代方法，GoStix Plus分析方法能夠?qū)崟r(shí)確定細(xì)胞培養(yǎng)物狀態(tài)，篩選出需要通過更耗費(fèi)成本和花費(fèi)更長時(shí)間的方法（如，功能分析，流式微球分析）去做進(jìn)一步界定和分析的樣品，有助于節(jié)約研究資源。此外，單次檢測形式，也避免了像多孔ELISA那樣需要等待樣品累積，可以加快研究進(jìn)度。 |
| ★ 支原體檢測 |
| 支原體污染一直都是困擾細(xì)胞培養(yǎng)的一個(gè)難題。如果在生產(chǎn)細(xì)胞庫中含有支原體，這種感染性外源因子甚至?xí)蔀榭赡艿闹掳┮蜃?。那么，支原體檢測就顯得尤為重要了。CycleavePCR™支原體檢測技術(shù)，采用Cycling Probe法以支原體16S rRNA為目的基因，可針對(duì)支原體進(jìn)行高靈敏度的特異性檢出。該技術(shù)可檢測包含口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體和萊氏無膽甾原體在內(nèi)的至少10種支原體。 |
| 沒有困難的工作，只有不夠鋒利的砍柴刀。Takara Bio高效基因改造解決方案，硬核輸出，助您利刃出擊實(shí)力出圈。希望有了新技術(shù)新工具的加持，腫瘤治療研究可以有進(jìn)一步的突破，讓更多人類無力抗?fàn)幍哪[瘤疾病從無望治療變成有望治愈。 |
| 以為只有這些？當(dāng)然不是，我們?cè)诓《净驅(qū)胂到y(tǒng)方面造詣?lì)H深，體系完備。慢病毒系統(tǒng)，有！逆轉(zhuǎn)錄病毒系統(tǒng)，有！腺病毒、腺相關(guān)病毒系統(tǒng)，也都有！如果您正無從選擇，那么恭喜，您將迎來您和Takara間的雙向奔赴。 |
頁面更新：2022-01-20 16:41:45
|
使用規(guī)章丨聯(lián)系方式丨 關(guān)于個(gè)人信息的保護(hù)丨特別說明
寶日醫(yī)生物技術(shù)（北京）有限公司
Copyright ? 2015 Takara Biomedical Technology (Beijing) Co., Ltd. All rights reserved. 京ICP備06030419號(hào)-1
京公網(wǎng)安備 110114000405號(hào)
