| 高效反轉(zhuǎn)錄，lncRNA等低拷貝RNA檢測(cè)的關(guān)鍵 |
| RT-qPCR是檢測(cè)低拷貝RNA的一種比較實(shí)用的技術(shù)，RNA拷貝數(shù)低，對(duì)于檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確度的要求非常高。 |
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| ·由于樣本或細(xì)胞類型的本身質(zhì)量問題，或RNA本身表達(dá)水平低，感興趣的RNA分子可能以低拷貝數(shù)存在。例如，雖然某些組織（如肝臟）每毫克中含有微克數(shù)量的RNA，但在其他組織類型中（如骨骼或脂肪），等量的組織中可能含有小于1%的RNA。 ·樣本本身是一個(gè)限制因素，而冷凍或保存的FFPE組織等樣本可能是不可替代的或非常珍稀寶貴的，因此獲得可靠的RT-qPCR數(shù)據(jù)至關(guān)重要。 ·在長(zhǎng)期儲(chǔ)存過程中也可能會(huì)造成RNA損失。 ·調(diào)節(jié)蛋白如轉(zhuǎn)錄因子對(duì)細(xì)胞功能有很強(qiáng)的影響，但也可能在低水平表達(dá)。 ·還有一些RNA分子如非編碼RNA（pre-miRNA、miRNA、lncRNA等）也可能以低拷貝數(shù)存在。 |
| 使用傳統(tǒng)技術(shù)檢測(cè)這些目的RNA可能是比較困難的。 |
| PrimeScript反轉(zhuǎn)錄酶的敏感性已被充分證明，例如，根據(jù)文獻(xiàn)內(nèi)容，該酶在total RNA pool中可以檢測(cè)到10-21 mol miRNA，同時(shí)，該酶的特異性可以區(qū)分含有單堿基錯(cuò)配的miRNA。 |
| 以下總結(jié)了使用PrimeScript反轉(zhuǎn)錄酶對(duì)具有挑戰(zhàn)性的RNA樣本RT-qPCR檢測(cè)的文獻(xiàn)。 |
檢測(cè)小鼠肺組織中的甲型流感病毒: Zou, Q., et al. Use of praziquantel as an adjuvant enhances protection and Tc-17 responses to killed H5N1 virus vaccine in mice. PLoS ONE 7, e34865 (2012). 1.png)
H5N1甲型禽流感病毒具有高致病性，需要更多關(guān)于如何誘導(dǎo)廣泛的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞對(duì)H5N1滅活疫苗產(chǎn)生反應(yīng)的信息。文獻(xiàn)報(bào)告，吡喹酮(PZQ)佐劑可增強(qiáng)小鼠對(duì)H5N1病毒致死劑量攻擊的保護(hù)作用。小鼠肺組織中的病毒量檢測(cè)使用了One-Step TB Green PrimeScript RT-PCR Kit II (Perfect Real Time)（Code No. RR086）
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PrimeScript RT Master Mix (Perfect Real Time) 用于分析lncRNA: Mizutani, R., et al. Identification and characterization of novel genotoxic stress-inducible nuclear long noncoding RNAs in mammalian cells. PLoS ONE 7, e34949 (2012). 作者使用生物信息學(xué)方法鑒定了可能參與基因毒性應(yīng)激反應(yīng)的新lncRNA分子，并使用PrimeScript RT Master Mix (Perfect Real Time) （Code No. RR036）通過RT-qPCR研究了表達(dá)模式。 |
miRNA and pre-miRNA PrimeScript Reverse Transcriptase用于檢測(cè)10-21mol miRNA: Yao, B., et al Quantitative analysis of zeptomole microRNAs based on isothermal ramification amplification. RNA 15, 1787 (2009).
作者報(bào)告開發(fā)了一種靈敏且特異的等溫分支擴(kuò)增(RAM)實(shí)時(shí)測(cè)定法， 用于miRNA的定量分析，無(wú)需進(jìn)一步富集即可準(zhǔn)確定量總RNA 樣品中的miRNA。PrimeScript Reverse Transcriptase（Code No. 2680）用于將miRNA初始反轉(zhuǎn)錄為cDNA。
PrimeScript RT reagent Kit用于分析pre-miRNAs: Tang, Y., et al. Genome-wide analysis reveals diversity of rice intronic miRNAs in sequence structure, biogenesis and function. PLoS ONE 8, e63938 (2013).
雖然大多數(shù) miRNA 位于基因間區(qū)域，但有些存在于內(nèi)含子(in-miRNA)中。作者在水稻中發(fā)現(xiàn)了新的in-miRNA分子，并使用PrimeScript RT reagent Kit（Code No. RR037）通過終點(diǎn)法 RT-PCR分析pre-miRNA分子。 |
PrimeScript RT reagent Kit用于分析人子宮肌層與子宮平滑肌瘤(frozen and FFPE samples): Makino, K., et al. Inhibition of uterine sarcoma cell growth through suppression of endogenous tyrosine kinase B signaling. PLoS ONE7, e41049 為了更好地了解子宮平滑肌肉瘤（一種對(duì)許多治療方案具有抵抗力的侵襲性腫瘤）的調(diào)節(jié)作用，作者評(píng)估了腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)和受體酪氨酸激酶B (TrkB)及其配體在子宮組織臨床樣本中的表達(dá)。PrimeScript RT reagent Kit（Code No. RR037）用于qRT-PCR分析TrkB 及其配體在子宮肌層和平滑肌瘤的冷凍樣本和平滑肌肉瘤的FFPE樣本中的表達(dá)水平。 |
PrimeScript Reverse Transcriptase用于分析轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá): Yamamoto, M., et al. Shared and distinct functions of the transcription factors IRF4 and IRF8 in myeloid cell development. PLoS ONE 6, e25812 (2011). 干擾素調(diào)節(jié)因子(IRF) 8和IRF4是控制樹突狀細(xì)胞和B細(xì)胞分化的造血細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子。使用PrimeScript Reverse Transcriptase （Code No. 2680）進(jìn)行RT-qPCR，作者研究了 IRF4和IRF8本身的表達(dá)模式，以及以前已知受IRF8調(diào)節(jié)的幾個(gè)巨噬細(xì)胞相關(guān)基因。 |
| PrimeScript Reverse Transcriptase是一種高靈敏度和高特異性的重組反轉(zhuǎn)錄酶，不含RNaseH活性，是Takara公司依據(jù)M-MLV (Moloney Murine Leukemia Virus)來源的RTase開發(fā)的一種反轉(zhuǎn)錄酶。 Takara在PrimeScript反轉(zhuǎn)錄酶基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)開發(fā)了不同功能的試劑盒，總結(jié)如下表。 |
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頁(yè)面更新：2022-05-31 16:29:39
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