| 術(shù)業(yè)有專攻， Takara蛋白質(zhì)檢測(cè)實(shí)用工具助您輕松應(yīng)對(duì)Western Blotting實(shí)驗(yàn)！ |
| Western Blotting(蛋白質(zhì)印跡法)是分子生物學(xué)中常用的一種實(shí)驗(yàn)方法。其基本原理是將蛋白質(zhì)樣品經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如纖維素薄膜）上，利用抗原抗體反應(yīng)來檢測(cè)目的蛋白質(zhì)。Western Blotting一般操作流程如下： |
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| 今天小編就來介紹一些Western Blotting相關(guān)的Takara蛋白質(zhì)檢測(cè)實(shí)用工具，幫助大家提高實(shí)驗(yàn)成功率！ |
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| 封閉試劑的選擇：在這步實(shí)驗(yàn)操作中，為了防止蛋白質(zhì)檢測(cè)抗體非特異性與膜結(jié)合，對(duì)未結(jié)合蛋白質(zhì)的膜區(qū)域進(jìn)行封閉很重要。有時(shí)使用特定的一種封閉劑未必能達(dá)到預(yù)期效果，因此可以多準(zhǔn)備幾種封閉劑進(jìn)行點(diǎn)雜交預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定合適的封閉劑。 常見的封閉試劑有脫脂奶粉、BSA，但這類封閉劑都含有哺乳動(dòng)物來源成分，可能會(huì)與哺乳動(dòng)物來源抗體產(chǎn)生非特異性交叉反應(yīng)。Takara提供了兩種不含哺乳動(dòng)物來源成分的封閉劑，為您提供更多的封閉劑選擇： |
| ① Western BLoT Blocking Buffer (Fish Gelatin) （Code No. T7131A），本產(chǎn)品使用魚來源明膠作為封閉劑，同哺乳動(dòng)物來源的奶粉和BSA相比，不會(huì)與哺乳動(dòng)物來源抗體產(chǎn)生非特異性交叉反應(yīng)，能夠明確地檢測(cè)出特異性抗原。由于是即用型試劑，無需稀釋，因此既可直接用于封閉Western印跡膜；也可作為一抗、HRP或AP標(biāo)記二抗的稀釋液。 ② Western BLoT Blocking Buffer（Protein Free）（Code No. T7132A）是一款化學(xué)成分組成的封閉緩沖液，不含蛋白質(zhì)，可以很好地抑制非特異性信號(hào)，能夠有效地用于檢測(cè)磷酸化蛋白質(zhì)。這款同樣也是即用型試劑。 |
| 抗體剝離試劑（Stripping Buffer）：Stripping Buffer是指能從膜上去除一抗和二抗，但不影響膜上結(jié)合的待測(cè)蛋白質(zhì)的試劑。由于目的蛋白質(zhì)的濃度和使用的抗體濃度不同，膠片曝光條件也不同，因此使用這款比較有特點(diǎn)的抗體剝離試劑可以有效去除膜上的抗體，幫助大家反復(fù)摸索實(shí)驗(yàn)條件，節(jié)省抗體。 Western BLoT Stripping Buffer （Code No. T7135A），使用本試劑能在室溫下從膜上將一抗、二抗和檢測(cè)試劑去除，之后可在同一膜上進(jìn)行目的蛋白質(zhì)和其他蛋白質(zhì)的再次檢測(cè)，可以幫助您重新研討和優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件。 |
| 抗原抗體反應(yīng)促進(jìn)劑：可以顯著提高檢測(cè)靈敏度，即使僅有少量抗體也可以有效進(jìn)行抗體反應(yīng)，提升檢測(cè)信號(hào)強(qiáng)度。 ① Western BLoT Immuno Booster （Code No. T7111A）適用于包括Western Blotting和ELISA在內(nèi)的各種免疫檢測(cè)，可提高最終的檢測(cè)靈敏度(從數(shù)倍到數(shù)十倍)。 ② Western BLoT Immuno Booster PF （Code No. T7115A）不含蛋白質(zhì)，可與Western BLoT Blocking Buffer（Protein Free）（Code No. T7132A）聯(lián)用，在不含外源蛋白質(zhì)的體系下進(jìn)行檢測(cè)和分析。 |
| 蛋白質(zhì)定量試劑的選擇：為了保持不同樣品的上樣量一致，以便于后續(xù)結(jié)果分析，通常會(huì)在WB之前對(duì)蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行定量處理。常用的蛋白質(zhì)定量方法有BCA法和Bradford法(考馬斯亮藍(lán)法)，Takara準(zhǔn)備了對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)定量試劑。 ① TaKaRa BCA Protein Assay Kit （Code No. T9300A）針對(duì)不同種類蛋白質(zhì)，測(cè)定值變動(dòng)小。可在20-2,000 μg/ml濃度范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)濃度與吸光度值成線性關(guān)系，受到表面活性劑的影響也較小。 ② TaKaRa Bradford Protein Assay Kit （Code No. T9310A）操作簡(jiǎn)單迅速，可在1-1,000 μg/ml濃度范圍內(nèi)進(jìn)行蛋白質(zhì)定量，并且不受還原劑的影響。 |
| 點(diǎn)擊下方圖片下載Western Blotting實(shí)驗(yàn)操作指南 |
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頁面更新：2022-10-31 15:53:27
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