| Takara Cas9核酸酶，一款功能強(qiáng)大的基因編輯工具酶！ | ||||||||
| CRISPR/Cas9基因編輯包括兩大組件：“向?qū)А眘gRNA和“剪刀”Cas9核酸酶，二者共同作用，結(jié)合形成切割復(fù)合體，能夠靶向地對(duì)外源基因進(jìn)行敲除、插入、定點(diǎn)突變等編輯，使得定點(diǎn)基因組改變的難度明顯降低，可進(jìn)行操作的目標(biāo)生物種類大大增加。 在基因編輯實(shí)驗(yàn)中，如何將sgRNA和Cas9蛋白質(zhì)導(dǎo)入細(xì)胞是十分重要的環(huán)節(jié)，選擇到合適的方法或體系可以大大提高基因編輯的成功率。 |
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| 目前基因編輯技術(shù)較為成熟，針對(duì)不同的細(xì)胞，更是開(kāi)發(fā)出了多種導(dǎo)入體系，較為成熟完善的傳統(tǒng)體系有質(zhì)粒載體導(dǎo)入、病毒載體導(dǎo)入，比較新穎且有特色的體系有納米囊泡系統(tǒng)導(dǎo)入以及RNP復(fù)合物的直接導(dǎo)入。在實(shí)驗(yàn)條件允許的情況下，相對(duì)于其他導(dǎo)入方式，RNP復(fù)合物的直接導(dǎo)入更加突出了以下幾點(diǎn)優(yōu)勢(shì)： 1、不使用Cas9基因，從而有效抑制由于基因殘留使Cas9持續(xù)表達(dá)造成的脫靶現(xiàn)象 2、不存在由于蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄、翻譯表達(dá)所引起的時(shí)間滯后，可實(shí)現(xiàn)快速有效的突變導(dǎo)入 3、不需要考慮每個(gè)靶向生物的啟動(dòng)子和密碼子 4、可以控制導(dǎo)入的Cas9蛋白質(zhì)的量 而Cas9核酸酶作為RNP復(fù)合物重要組成部分，選擇并使用一款優(yōu)質(zhì)的Cas9核酸酶就變得異常重要。Takara有來(lái)源于野生型釀膿鏈球菌的重組Cas9蛋白質(zhì)，助力基因編輯，錨定靶點(diǎn)切割！Guide-it Recombinant Cas9蛋白質(zhì)含量較高，可滿足電穿孔、顯微注射等多種不同復(fù)合物導(dǎo)入方式，C末端的NLS核定位信號(hào)可以實(shí)現(xiàn)快速有效的突變導(dǎo)入，且經(jīng)過(guò)不斷的產(chǎn)品優(yōu)化已證實(shí)對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞具有良好的耐受性，可降低導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞時(shí)所造成的細(xì)胞損傷，使脫靶效應(yīng)最小化的同時(shí)，更容易實(shí)現(xiàn)高效率的基因編輯。 |
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| 更穩(wěn)定！更高效！ | ||||||||
| 1.不同公司Cas9產(chǎn)品在hiPS細(xì)胞中基因敲除效率比較 | ||||||||
| 實(shí)驗(yàn)案例：Cellartis hiPSC-18細(xì)胞系中的基因敲除 | ||||||||
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| 數(shù)據(jù)來(lái)源于Takara Bio USA, Inc. | ||||||||
| 通過(guò)剪切后的條帶強(qiáng)度可以對(duì)編輯細(xì)胞所占的百分比進(jìn)行半定量估計(jì)。凝膠底部的每個(gè)數(shù)字代表所示RNP的基因編輯效率（以百分比表示）。結(jié)果顯示，與其他品牌推薦的制備向?qū)NA的方法相比，Guide-it Recombinant Cas9與Guide-it In Vitro Transcription Kit制備的sgRNA結(jié)合使用，可以為許多靶點(diǎn)提供一致且有效的基因編輯。 | ||||||||
| 更廣泛！更普適！ | ||||||||
| 2.不同細(xì)胞系人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（hiPSC）中基因敲除效率比較 | ||||||||
| 實(shí)驗(yàn)案例：多系人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（hiPSC）CD81基因敲除 | ||||||||
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| 在本實(shí)驗(yàn)中，將Cas9-sgRNA RNP復(fù)合物通過(guò)電穿孔方式導(dǎo)入至hiPSC-18 和hiPSC-22兩種誘導(dǎo)多能干細(xì)胞中敲除CD81基因。CD81抗體染色后，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示，電穿孔10天后hiPSC-18的敲除效率為91％，hiPSC-22的敲除效率為85％，顯示出非常高的基因編輯效率。 | ||||||||
| 更多應(yīng)用場(chǎng)景！ | ||||||||
| 3.Guide-it Recombinant Cas9用于基因敲入實(shí)驗(yàn) | ||||||||
| 實(shí)驗(yàn)案例：AAVS1和CXCR4基因同源定向修復(fù) | ||||||||
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| Panel A. 這些圖表展示了CD34+造血干細(xì)胞的HDR實(shí)驗(yàn)是如何完成的。將含有Hind III酶切位點(diǎn)的ssDNA模板插入AAVS1基因中，將同時(shí)含有Hind III和BamH I酶切位點(diǎn)的模板插入CXCR4基因中。每側(cè)同源臂長(zhǎng)度為90 bp。 Panel B. 將修復(fù)模板和Cas9/sgRNA RNPs通過(guò)電穿孔導(dǎo)入后，用PCR擴(kuò)增靶細(xì)胞中各目標(biāo)基因，并進(jìn)行酶切分析。編輯效率顯示在凝膠上每個(gè)陽(yáng)性孔上面。CXCR4基因經(jīng)過(guò)BamH I酶切后顯示出一條額外條帶，原因是基因編輯前野生型基因中已經(jīng)存在一個(gè)BamH I位點(diǎn)了。基因編輯5天后，我們證實(shí)98%的造血干細(xì)胞CD34+染色陽(yáng)性。 |
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| 更多生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別！ | ||||||||
| 4.GMP級(jí)別Cas9核酸酶效率驗(yàn)證 | ||||||||
| 為了滿足更多臨床研究試驗(yàn)的需求，Takara提供批次差異更低的產(chǎn)品，面向需要更高產(chǎn)品品質(zhì)的用戶，我們也同時(shí)提供Recombinant Cas9 Protein GMP grade，即GMP級(jí)別的Cas9核酸酶，制造過(guò)程中不使用人源或動(dòng)物源成分，已通過(guò)日本藥品與食品安全局（PFSB）的GMP級(jí)別標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)測(cè)試，得到生產(chǎn)許可，并在該標(biāo)準(zhǔn)下進(jìn)行制造和品質(zhì)管理，適用于體外細(xì)胞工程和基因治療研究。 | ||||||||
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| 以敲除293T細(xì)胞CD81基因?yàn)槔?，?duì)Guide-it Recombinant Cas9（632641）和Recombinant Cas9 Protein GMP grade（T230）進(jìn)行基因組組編輯性能對(duì)比，結(jié)果證實(shí)T230具有與632641/632640相同的基因組編輯效率。 | ||||||||
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| 關(guān)聯(lián)產(chǎn)品推薦 | ||||||||
| sgRNA的體外轉(zhuǎn)錄和篩選系統(tǒng) | ||||||||
| 可以被用來(lái)合成和檢測(cè)sgRNAs效率。該試劑盒包含了體外轉(zhuǎn)錄和純化sgRNAs，以及檢測(cè)重組Cas9核酸酶對(duì)PCR靶向片段剪切效率，可用于CRISPR/Cas9 研究中sgRNA的制備、純化和評(píng)價(jià)。 | ||||||||
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| · 通過(guò)體外轉(zhuǎn)錄有效制備用于CRISPR/Cas9基因編輯高品質(zhì)sgRNA的簡(jiǎn)便試劑盒 · 所制備sgRNA可用于體外剪切活性確認(rèn)實(shí)驗(yàn)和突變導(dǎo)入實(shí)驗(yàn) · sgRNA的產(chǎn)量、簡(jiǎn)便性及性價(jià)比進(jìn)一步優(yōu)化提升 |
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| Takara Guide-it™產(chǎn)品線長(zhǎng)期致力于基因編輯實(shí)驗(yàn)的解決方案！更多基因編輯相關(guān)資料歡迎您點(diǎn)擊下載CRISPR/Cas9基因編輯完整解決方案宣傳冊(cè)，或直接觀看在線講座視頻CRISPR/Cas9基因編輯全套操作和解決方案。 | ||||||||
頁(yè)面更新：2022-11-24 10:07:30
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