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產(chǎn)品選擇指南

技術服務信息

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GMP級別Cas9，更高生產(chǎn)標準的Cas9蛋白供您選擇！
 
作為基因編輯的重要元件，Cas9核酸酶的選擇非常重要。在實驗過程中能否選擇并使用到一款優(yōu)質(zhì)的Cas9核酸酶，對實驗成功與否起著決定性的作用。 為了滿足更多臨床研究試驗的需求，面向需要更高產(chǎn)品品質(zhì)的用戶，Takara提供批次差異更小的Recombinant Cas9 Protein GMP grade，即GMP級別的Cas9核酸酶。
 
該級別產(chǎn)品在制造過程中不使用人源或動物源成分，已通過日本藥品與食品安全局（PFSB）的GMP級別標準生產(chǎn)測試，得到生產(chǎn)許可，并在該標準下進行制造和品質(zhì)管理，適用于體外細胞工程和基因治療研究。
Code No. 產(chǎn)品名稱
T230   Recombinant Cas9 Protein GMP grade
 
Takara Recombinant Cas9 Protein GMP grade是目前廣泛用于基因組編輯的重組野生型釀膿鏈球菌（Streptococcus pyogenes）來源的Cas9蛋白質(zhì)（SpCas9），其C端攜帶猿猴病毒40（SV40）核定位信號NLS（nuclear-localization signal）。 SpCas9與來源于同種細菌的特定基因座CRISPR所轉錄的sgRNA形成核糖核蛋白（RNP：Ribonucleoprotein）復合物，導入至細胞內(nèi)可以序列特異性切斷雙鏈DNA[參考文獻1]，被廣泛用于包括哺乳動物細胞在內(nèi)的各種細胞，進行高效率的基因組編輯 [參考文獻2-3]。
本Cas9蛋白質(zhì)溶液成分經(jīng)過了優(yōu)化，對哺乳動物細胞具有良好的耐受性，可降低導入哺乳動物細胞時所造成的細胞損傷。將此Cas9蛋白質(zhì)和sgRNA制備的RNP復合物，通過電穿孔、顯微注射等方式導入至靶細胞進行敲除實驗，經(jīng)驗證該Cas9蛋白質(zhì)溶液對哺乳動物細胞具有良好的耐受性。
 
實驗例1. Takara Recombinant Cas9 Protein GMP grade與其他公司同類產(chǎn)品的性能對比
人iPS細胞中細胞表面蛋白的敲除實驗。在該實驗中，使用X、Y兩家公司的同類產(chǎn)品以及Takara GMP級重組Cas9蛋白（T230）分別與sgRNA 組成RNP復合物，并通過電穿孔的方式導入人iPS細胞中，分別或同時對兩種細胞表面蛋白A、B進行敲除。用流式細胞儀測定所得細胞的表面蛋白A、B的表達量，繪制蛋白敲除效率圖（%）。
數(shù)據(jù)由京都大學iPS細胞研究與應用中心（CiRA）Drs. Akitsu Hotta和 Huaigeng Xu提供。
 
實驗例2. Takara Recombinant Cas9 Protein GMP grade的基因編輯性能評估
敲除293T/17細胞系中CD81。在本實驗中，將Guide-it Recombinant Cas9 (632641)和Recombinant Cas9 Protein GMP grade(T230)兩種Cas9蛋白分別與sgRNA組成的RNP復合物通過電穿孔的形式導入到293T/17細胞中。條件1、2、3實驗脈寬均為20 ms，并分別在1,300、1,200和1,100 V的電壓條件下進行電穿孔。將在上述導入條件下導入RNP的細胞培養(yǎng)7天后，與PE標記的抗CD81抗體反應，通過FCM分析測定CD81陰性細胞率（%），結果顯示，與Guide-it Recombinant Cas9比較，產(chǎn)品“T230”具有與“產(chǎn)品632641”相同的基因編輯效率。
 
  其他熱銷 Cas9產(chǎn)品推薦  
◆ 重組Cas9蛋白質(zhì) (3 μg/μl)/(10 μg/μl)
Takara有來源于野生型釀膿鏈球菌的重組Cas9蛋白質(zhì)，助力基因編輯，錨定靶點切割！Guide-it Recombinant Cas9有多種蛋白質(zhì)濃度產(chǎn)品，可滿足電穿孔、顯微注射等多種不同復合物導入方式。C末端的NLS核定位信號可以實現(xiàn)快速有效的突變導入，且經(jīng)過不斷的產(chǎn)品優(yōu)化，已證實對哺乳動物細胞具有良好的耐受性，可降低導入哺乳動物細胞時所造成的細胞損傷，使脫靶效應更小化的同時，更容易實現(xiàn)高效率的基因編輯。
Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量
632640   Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl) 3 × 100 μg
632641 100 μg
632678   Guide-it Recombinant Cas9 (10 μg/μl) 200 μg
632679 500 μg
 
  其他關聯(lián)產(chǎn)品推薦  
◆ sgRNA的體外轉錄和篩選系統(tǒng)
可以被用來合成和檢測sgRNAs效率。該試劑盒包含了體外轉錄和純化sgRNAs，以及檢測重組Cas9核酸酶對PCR靶向片段剪切效率，可用于CRISPR/Cas9 研究中sgRNA的制備、純化和評價。
Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量
632636   Guide-it Complete sgRNA Screening System 50 Rxns
√ 通過體外轉錄有效制備用于CRISPR/Cas9基因編輯高品質(zhì)sgRNA的簡便試劑盒
√ 所制備sgRNA可用于體外剪切活性確認實驗和突變導入實驗
√ sgRNA的產(chǎn)量、簡便性及性價比進一步優(yōu)化提升
 
Takara Guide-it™產(chǎn)品線長期致力于基因編輯實驗的解決方案！更多基因編輯相關資料歡迎您點擊下載CRISPR/Cas9基因編輯完整解決方案宣傳冊，或直接觀看在線講座視頻CRISPR/Cas9基因編輯全套操作和解決方案。
 
參考文獻：
1) Jinek M, Chylinsky K, Fonfara I, Hauer M, Doudna J A, and Charpentier E. A programmable dual-RNA-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity. Science. (2012) 337 (6096): 816-821.
2) Liang X et al. Rapid and highly efficient mammalian cell engineering via Cas9 protein transfection. J Biotechnol. (2015) 208: 44-53.
3) Sander J D and Joung J K. CRISPR-Cas9 systems for genomic editing, regulation and targeting. Nat Biotechnol. (2014) 32: 347-355
 
 

頁面更新：2022-12-16 11:16:13