E.coli BL21來源于B株，為lon蛋白水解酶、ompT外膜蛋白水解酶缺陷型，因此表達(dá)的外源蛋白質(zhì)在該體系中具有更高的穩(wěn)定性。本制品有利于外源蛋白質(zhì)的穩(wěn)定表達(dá)。
本制品可用于pCold I-IV DNA 和pCold TF DNA的蛋白質(zhì)表達(dá)，但不適合于啟動(dòng)子為T7的蛋白質(zhì)表達(dá)體系，如pET系列，因?yàn)锽L21宿主不表達(dá)T7 RNA聚合酶。另外，不建議使用此菌株構(gòu)建或制備質(zhì)粒，因?yàn)樗皇?em>recA基因缺失型菌株。
注意：本制品不可用于電擊法轉(zhuǎn)化。 |
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| ■ 保存 |
-80℃。
注意：如果不是-80℃保存，轉(zhuǎn)化效率將會(huì)降低。可使用附帶的pUC19 DNA確認(rèn)保存細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。不能液氮保存。
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| ■ 質(zhì)量控制 |
轉(zhuǎn)入1 ng 的pUC19 DNA，涂于含有Amp+的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。
轉(zhuǎn)化效率 : ≥1×106 colonies /μg pUC19 DNA
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| ■ Genotype |
E.coli BL21: F-, ompT, hsdSB (rB-mB-), gal, dcm
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| ■ 注意事項(xiàng) |
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80℃冷凍取出后請(qǐng)立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
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| 2. 當(dāng)使用100 μl感受態(tài)細(xì)胞時(shí)，加入不超過10 ng的高純度質(zhì)粒DNA。否則轉(zhuǎn)化效率會(huì)降低。 |
| 3. 當(dāng)改變感受態(tài)細(xì)胞數(shù)量或tubes類型時(shí)，適當(dāng)調(diào)整反應(yīng)條件。 |
| 4. 使用TE buffer溶解純化的質(zhì)粒DNA。DNA溶液如果鹽濃度高，可能會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。 |
| 5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培養(yǎng)基。此時(shí)，轉(zhuǎn)化效率可能會(huì)降低。 |
| ·L-broth : |
Ingredient |
per liter water |
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Tryptone |
10 g |
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Yeast extract |
5 g |
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NaCl |
5 g |
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| 用1 N NaOH調(diào)整pH到7.5并高壓滅菌。 |
| ·φb-broth: |
Ingredient |
per liter water |
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Tryptone |
20 g |
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Yeast extract |
5 g |
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MgSO4·7H2O |
5 g |
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| 用1 N KOH調(diào)整pH到7.5并高壓滅菌。 |
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| 6. 稀釋時(shí)，使用SOC培養(yǎng)基。 |
| 7. 不建議將解凍的感受態(tài)細(xì)胞再次冷凍保存。但是，如果再次凍結(jié)不可避免，將細(xì)胞置于干冰/乙醇中迅速冷凍，置于-80℃保存。但是，轉(zhuǎn)化效率可能會(huì)降低至少一個(gè)數(shù)量級(jí)。 |
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