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產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

當(dāng)前位置:首頁> 產(chǎn)品選擇指南 > 一般PCR相關(guān)制品 > 特殊用途:多重PCR,防污染等 > 防止PCR假陽性反應(yīng)的試劑盒TaKaRa Taq HS PCR Kit, UNG plus
防止PCR假陽性反應(yīng)的試劑盒TaKaRa Taq HS PCR Kit, UNG plus
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價格(元) 說明書 數(shù)量
Takara R013S TaKaRa Taq HS PCR Kit, UNG plus 50 Rxns ¥623
Takara R013A TaKaRa Taq HS PCR Kit, UNG plus 200 Rxns ¥2,228
 
■ 制品內(nèi)容 (Code No.: R013A : 50 μl反應(yīng)×200次量)
TaKaRa Taq HS (5U/μl) 50 μl
10 × PCR Buffer for UNG plus*1 (10 ×) 1 ml
dU plus dNTP Mixture*2 (12.5 ×) 800 μl
UNG (2 U/μl) 100 μl
   
*1 Mg2+濃度:22.5 mM (10×)
因dUTP的濃度設(shè)定是dTTP的3倍,所以總體dNTP的濃度變高,雖然PCR Buffer中含有MgCl2,但為了保持MgCl2與dNTP量的平衡,本制品中的Mg2+濃度高于TaKaRa Taq Hot Start Version (Code No. R007A)附帶的10× PCR Buffer (Mg2+ plus)。
*2 dU plus dNTP Mixture:dUTP 7.5 mM、dATP 2.5 mM、dGTP 2.5 mM、dCTP 2.5 mM
 
 
■ 制品說明
PCR是一種非常敏感的DNA擴(kuò)增技術(shù),易受污染影響,PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的污染會產(chǎn)生假陽性結(jié)果。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的污染是End-point PCR方法,特別在食品、環(huán)境檢測中是令人頭痛的問題。
本制品是一種可防止假陽性產(chǎn)生的試劑盒。使用本制品是在PCR反應(yīng)時以dUTP取代dTTP,并同時使用Hot Start型DNA聚合酶TaKaRa Taq HS進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。反應(yīng)液配制后,對含有dU的DNA具有降解作用的UNG酶(Uracil-N-glycosylase)可選擇性水解含有尿嘧啶的PCR產(chǎn)物,而對不含尿嘧啶的模板無任何影響。
UNG的作用原理:在PCR反應(yīng)前25℃、10分鐘反應(yīng)中,UNG酶可水解PCR反應(yīng)液中含有尿嘧啶的PCR產(chǎn)物的尿嘧啶堿基和糖磷酸骨架的N-糖苷鍵,產(chǎn)生脫嘧啶位點。隨后進(jìn)行95℃、2分鐘熱處理,在UNG酶失活的同時進(jìn)一步對磷酸骨架水解,從而消除含有尿嘧啶的PCR產(chǎn)物的污染。
UNG酶可以作用于單鏈或雙鏈DNA,對RNA無活性。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 注意事項
從反應(yīng)液的配制到PCR產(chǎn)物的檢出應(yīng)分別在4個操作區(qū)操作,操作區(qū)推薦進(jìn)行物理性隔離。
操作區(qū)1:反應(yīng)液的配制及分裝。
操作區(qū)2:樣品的制備。
操作區(qū)3:將樣品添加到反應(yīng)液中。
操作區(qū)4:PCR反應(yīng)及凝膠電泳對PCR產(chǎn)物進(jìn)行檢出。
為防止污染,除在操作區(qū)4外,請避免對裝有PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的tube進(jìn)行開閉。
 
 

頁面更新:2023-11-01 16:16:24

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