| |
| |
|
| |
| |
| ■ 制品內(nèi)容 |
| pMD 19-T Vector (50 ng/μl) |
20 μl × 1 支 |
| Control Insert (50 ng/μl) |
10 μl × 1 支 |
| Solution I* |
75 μl × 2 支 |
| |
|
| * 使用時請于冰中融解。 |
|
|
| |
| ■ 制品說明 |
pMD 19-T Vector是一種高效克隆PCR產(chǎn)物 (TA Cloning) 的專用載體。本載體由pUC19載體改建而成，在pUC19載體的多克隆位點處的Xba I 和Sal I 識別位點之間插入了EcoR V 識別位點，用EcoR V 進行酶切反應(yīng)后，再在兩側(cè)的3′端添加 “T” 而成。因大部分耐熱性DNA聚合酶進行PCR反應(yīng)時都有在PCR 產(chǎn)物的3′末端添加一個 “A” 的特性，所以使用本制品可以大大提高PCR產(chǎn)物的連接、克隆效率。
由于本載體以pUC19載體為基礎(chǔ)構(gòu)建而成，所以它具有同pUC19載體相同的功能。此外，本制品中的高效連接液Solution I 可以在短時間內(nèi) (約30分鐘) 完成連接反應(yīng)，其連接液可以直接用于細菌轉(zhuǎn)化，大大方便了實驗操作。本制品中的Control Insert (500 bp) 還可以用于Control反應(yīng)。
本載體與pMD 18-T Vector 相比，本制品的β-半乳糖苷酶的表達活性更高，菌落顯示藍色的時間縮短，菌落顯示的藍色更深。因此，克隆后更容易進行克隆體的藍白篩選。 |
| |
| ■ 保存 |
| -20℃。 |
| |
| ■ 純度 |
| Control Insert經(jīng)克隆后的白色菌落中，有90%以上含有Insert DNA片段。 |
| |
| ■ 用途 |
1. 進行TA克隆，克隆PCR產(chǎn)物。
2. 對克隆后的PCR產(chǎn)物使用BcaBEST Sequencing Primers、M13 Primers進行DNA測序。 |
| |
|
| ■ pMD 19-T Vector的結(jié)構(gòu) |
 |
| |
| ■ 注意事項 |
1. Solution I 請于冰中融解。
2. 克隆時使用的Insert DNA片段 (PCR產(chǎn)物) 建議進行切膠回收純化，否則PCR產(chǎn)物中的短片段DNA (甚至是電泳也無法確認的非特異性小片段)、殘存引物等雜質(zhì)都會影響TA克隆效率。
3. 按照本實驗操作進行連接后，直接進行轉(zhuǎn)化時的連接液不要超過20 μl。當要轉(zhuǎn)化的DNA量較大或準備進行電轉(zhuǎn)化時，需對連接液進行乙醇沉淀，純化DNA后再進行轉(zhuǎn)化。進行乙醇沉淀時使用Dr. GenTLE Precipitation Carrier (Code No.: 9094) 可以提高DNA的回收率。
4. 連接反應(yīng)請在25℃以下進行，溫度升高 (>26℃) 較難形成環(huán)狀DNA。連接效率偏低時，可適當延長連接反應(yīng)時間至數(shù)小時。
5. 本制品來源于pUC19載體，因此，適合pUC19載體的感受態(tài)細胞都可以使用，如：JM109等。 |
| |
| |
京公網(wǎng)安備 110114000405號
物純化（灰）.png)
化感受態(tài)細胞（灰）.png)
