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產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

當(dāng)前位置：首頁> 產(chǎn)品選擇指南 > cDNA合成 & 克隆 > DNA Ligation > 連接試劑盒DNA Ligation Kit Ver.2.1
連接試劑盒DNA Ligation Kit Ver.2.1
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價(jià)格（元） 說明書 數(shù)量
Takara 6022Q DNA Ligation Kit Ver.2.1 1 Kit ￥206
Takara 6022 DNA Ligation Kit Ver.2.1 1 Kit ￥516
無標(biāo)題文檔
 
 
RNA起始合成cDNA → PCR擴(kuò)增目的片段 → PCR產(chǎn)物純化 → In-Fusion無縫克隆 → 轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
 
TA克隆
基因組DNA  
粘性末端連接
 
 
■ 制品內(nèi)容 (Code No.: 6022：100 次)
Solution Ⅰ：Enzyme Solution 3 × 250 μl
Solution Ⅱ：Concatenation Buffer 1 × 750 μl
Solution Ⅲ：Transformation Enhancer 1 × 200 μl
 
* 如果每次使用7.5 μl Solution Ⅰ則可反應(yīng)100次。
 
■ 制品說明
本試劑盒是用于快速DNA連接反應(yīng)的簡易系統(tǒng)。在本試劑進(jìn)行連接反應(yīng)時(shí)，只需要加入一種包含T4 DNA Ligase和最適buffer的酶溶液，終反應(yīng)液體積小。因?yàn)榉磻?yīng)高效，大多數(shù)連接反應(yīng)只需3分鐘，較難的反應(yīng)也可在30分鐘內(nèi)完成。
轉(zhuǎn)化之前在連接混合液中加入Solution III（轉(zhuǎn)化增強(qiáng)劑）有助于提高轉(zhuǎn)化效率。如果目的DNA含量低或預(yù)期的連接效率較低，建議使用Solution III。連接反應(yīng)液不必經(jīng)過DNA純化，可直接用于細(xì)菌的轉(zhuǎn)化。
 
■ 保存
-20℃。Solution Ⅲ融化后室溫保存，如果產(chǎn)生沉淀，可渦旋數(shù)分鐘溶解。
 
■ Ligation Kit 的操作示意圖及連接效率圖
 
 
■ 使用注意
1. 試劑盒中的Solution Ⅰ和Solution Ⅱ建議-20℃保存，反復(fù)凍融不會(huì)失活。Solution Ⅰ因含有T4 DNA Ligase，使用前請?jiān)诒腥诨⑤p柔混勻。Solution Ⅱ可在室溫融化并混勻。Solution Ⅲ一旦融化，就應(yīng)于室溫保存，若有沉淀，使用前請渦旋溶解。
2. DNA連接液可直接用于瓊脂糖凝膠電泳。如要進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳時(shí)，建議使用乙醇沉淀法*濃縮 DNA，請不要用苯酚抽提DNA連接液。
* 乙醇沉淀法：
1) 在反應(yīng)液中加入1/10體積的3 M CH3COONa (pH5.2) 或1/20體積的5 M NaCl和2-2.5倍體積的無水乙醇。
2) -20℃靜置20分鐘或-80℃靜置10分鐘。
3) 4℃離心收集DNA。當(dāng)DNA的含量較少時(shí)，可加入carrier使沉淀效果更好。
3. 如果在反應(yīng)液中加入苯酚，則會(huì)出現(xiàn)類似沉淀物的白色渾濁，將不能用于連接反應(yīng)。
 
 

頁面更新：2023-12-01 14:43:17

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