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■ 制品內(nèi)容 |
| E.coli DH5α Competent Cells |
100 μl × 10 |
| pUC19 plasmid ( 0.1 ng/μl) |
10 μl |
| SOC Medium* |
1 ml × 10 |
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| *SOC Medium: 2% |
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Tryptone |
| 0.5% |
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Yeast extract |
| 10 mM |
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NaCl |
| 2.5 mM |
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KCl |
| 10 mM |
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MgSO4 |
| 10 mM |
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MgCl2 |
| 20 mM |
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Glucose |
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| ■ 制品說明 |
Takara在Hanahan's method基礎(chǔ)上進(jìn)行了改良，制備出E.coli DH5α Competent Cells。
E.coli DH5α Competent Cells在使用pUC系列質(zhì)粒載體進(jìn)行DNA轉(zhuǎn)化時，利用β-半乳糖苷酶活性 (α-互補性)，通過藍(lán)白斑方法可以很容易地鑒別重組體菌株。由于菌株無lac lq，故不需要IPTG。因此，當(dāng)制作基因文庫或進(jìn)行亞克隆時，可以使用X-Gal篩選重組DNA或重組質(zhì)粒。
X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside |
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| ■ 細(xì)胞濃度 |
| 1 - 2×109 bacteria/ml |
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| ■ Genotype |
| E.coli DH5α : F-, φ 80dlacZ ΔM15, Δ(lacZYA -argF )U169, deoR , recA1 , endA1 , hsdR17 (rK-, mK+), phoA, supE44 , λ-, thi -1, gyrA96 , relA1
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| ■ 保存 |
-80℃。
注意： -80℃或更低溫度下保存。如果保存溫度不能恒定，轉(zhuǎn)化效率將會降低。請使用附帶的pUC19 對照質(zhì)粒來確認(rèn)保存細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。不能液氮保存。 |
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| ■ 質(zhì)量控制 |
| 1. 轉(zhuǎn)化效率 |
轉(zhuǎn)入1 ng 的pUC19，涂于含有Amp+ 的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。
轉(zhuǎn)化效率 : >1 x 108 transformants/μg pUC19 |
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| 2. β-半乳糖苷酶的α-互補性 |
| 當(dāng)使用pUC19 plasmid進(jìn)行轉(zhuǎn)化時，含有100 μg/ml Ampicillin和60 μg/ml X-Gal的L-agar plate出現(xiàn)藍(lán)色菌落。 |
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| ■ 注意事項 |
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80℃冷凍取出后請立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
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| 2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圓底 tubes (BD company Code: 352059 或 352057,等)，但效率可能會降低。 |
| 3. 當(dāng)使用100 μl感受態(tài)細(xì)胞時，加入的高純度DNA樣品不要超過10 ng。否則轉(zhuǎn)化效率會降低。 |
| 4. 當(dāng)改變感受態(tài)細(xì)胞數(shù)量或tubes類型時，適當(dāng)調(diào)整反應(yīng)條件。例如，當(dāng)使用1.5 ml microcentrifuge tubes時，42℃放置60秒而不是45秒。 |
| 5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培養(yǎng)基。此時，轉(zhuǎn)化效率可能會降低。 |
| ·L-broth : |
Ingredient |
per liter water |
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Tryptone |
10 g |
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Yeast extract |
5 g |
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NaCl |
5 g |
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| 用1 N NaOH調(diào)整pH到7.5并高壓滅菌。 |
| ·φ b-broth: |
Ingredient |
per liter water |
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Tryptone |
20 g |
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Yeast extract |
5 g |
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MgSO4·7H2O |
5 g |
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| 用1 N KOH調(diào)整pH到7.5并高壓滅菌。 |
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| 6. 當(dāng)加入X-Gal時，按照以下操作進(jìn)行： |
| ·將 20 mg/ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml的比例加入到 agar培養(yǎng)基中。 |
| 7. DH5α可用于M13mp載體的復(fù)制。但由于其不攜帶F因子，因而不能形成菌斑。 |
| 8. 不建議將解凍的感受態(tài)細(xì)胞再次冷凍保存。但是，如果再次凍結(jié)不可避免，將細(xì)胞置于干冰/乙醇中迅速冷凍，置于-80℃保存。但是，轉(zhuǎn)化效率可能會降低至少一個數(shù)量級。 |
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京公網(wǎng)安備 110114000405號
增目的片段（灰）.png)
物純化（灰）.png)
化感受態(tài)細(xì)胞（黃）.png)
