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| ■ 制品內(nèi)容 |
| E.coli DH5α Electro-Cells |
50 μl × 10 |
| pUC19 plasmid ( 10 pg/μl) |
10 μl |
| SOC Medium* |
1 ml × 10 |
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| *SOC Medium: 2% |
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Tryptone |
| 0.5% |
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Yeast extract |
| 10 mM |
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NaCl |
| 2.5 mM |
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KCl |
| 10 mM |
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MgSO4 |
| 10 mM |
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MgCl2 |
| 20 mM |
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Glucose |
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| ■ 制品說明 |
E. coli DH5α Electro-Cells是Takara Bio特別制備的適用于電穿孔法的制品。用高電壓脈沖電流瞬間擊穿細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)膜，從而使外源DNA轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)化方法稱為電穿孔法。通過此種方法制備的感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化效率高、產(chǎn)量大，尤其適合在短時(shí)間內(nèi)將少量樣品轉(zhuǎn)入大腸桿菌內(nèi)。
E.coli DH5α在使用pUC系列質(zhì)粒載體進(jìn)行DNA轉(zhuǎn)化時(shí)，利用β-半乳糖苷酶活性 (α-互補(bǔ)性) ，應(yīng)用藍(lán)白斑方法可以很容易鑒別重組體菌株。由于菌株無lacl q，故不需要IPTG。因此，當(dāng)制作基因文庫或進(jìn)行亞克隆時(shí)，可以使用X-Gal篩選重組DNA或重組質(zhì)粒。
X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside |
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| ■ 細(xì)胞濃度 |
| >1×1010 bacteria/ml |
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| ■ Genotype |
| E. coli DH5α：F-, φ80dlacZ Δ M15, Δ ( lacZYA -argF )U169, deoR , recA1 , endA1 , hsdR17 (rK-, mK+),
phoA , supE44 , λ-, thi -1 , gyrA96 , relA1
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| ■ 保存 |
-80℃。
注意： -80℃或更低溫度下保存。如果保存溫度不能恒定，轉(zhuǎn)化降低將會(huì)降低。請使用附帶的pUC19 對照質(zhì)粒來確認(rèn)保存細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。不能液氮保存。 |
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| ■ 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) |
1. 轉(zhuǎn)化效率
轉(zhuǎn)入10 pg 的pUC19，涂于含有A+ 的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。
轉(zhuǎn)化效率 : >1 x 109 transformants /μg pUC19
2. β-半乳糖苷酶的α-互補(bǔ)性
轉(zhuǎn)化pUC19 DNA時(shí)，含有100 μg/ml ampicilin 和 60 μg/ml X-Gal的L-瓊脂平板上出現(xiàn)藍(lán)色菌落。 |
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| ■ 注意事項(xiàng) |
1. 將Electro-Cells從-80℃取出后請立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
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| 2. 當(dāng)使用50 μl Electro-Cells時(shí)，添加不多于10 ng的高純度樣品DNA。否則會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。 |
| 3. 導(dǎo)入分子量較大的DNA (＞7 kb) 時(shí)，轉(zhuǎn)化效率降低。 |
| 4. 當(dāng)改變實(shí)驗(yàn)規(guī)模時(shí)，適當(dāng)改變反應(yīng)條件。 |
| 5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培養(yǎng)基。此時(shí)，轉(zhuǎn)化效率可能會(huì)降低。 |
| ·L-broth: Ingredient |
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per liter water |
| Tryptone |
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10 g |
| Yeast extract |
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5 g |
| NaCl |
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5 g |
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| 用1 N NaOH調(diào)整pH到7.5并高壓滅菌。 |
| ·φb-broth: Ingredient |
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per liter water |
| Tryptone |
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20 g |
| Yeast extract |
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5 g |
| MgSO4·7H2O |
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5 g |
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| 用1 N KOH調(diào)整pH7.5左右并高壓滅菌。 |
| 6. 稀釋時(shí)，使用“使用方法4”中加入的SOC培養(yǎng)基。 |
| 7. 當(dāng)使用X-Gal時(shí)： |
| ·將20 mg/ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200～300 μl/100 ml的比例加入到agar medium中。 |
| 8. DH5α可作為M13mp載體的復(fù)制。但由于不攜帶F因子，因而不能形成菌斑。 |
| 9. 不建議將解凍的感受態(tài)細(xì)胞再次冷凍保存。但是，如果再次凍結(jié)不可避免，將細(xì)胞置于干冰/乙醇中迅速冷凍，置于-80℃保存。但是，轉(zhuǎn)化效率可能會(huì)降低至少一個(gè)數(shù)量級。 |
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京公網(wǎng)安備 110114000405號
增目的片段（灰）.png)
物純化（灰）.png)
化感受態(tài)細(xì)胞（黃）.png)
