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| ■ 制品內(nèi)容 (20 次量) |
| A-Tailing Enzyme (5 U/μl) |
10 μl |
| 10×A-Tailing Buffer |
100 μl |
| dNTP Mixture (each 2.5 mM) |
80 μl |
| A-Tailing Control Insert* (50 ng/μl) |
10 μl |
| Blunting Control Insert* (50 ng/μl) |
50 μl |
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| * A-Tailing Control Insert 和Blunting Control Insert各為5次使用量。 | |
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| ■ 制品說(shuō)明 |
| TaKaRa DNA A-Tailing Kit 是在平滑末端DNA片段的3’末端添加一個(gè)“A”尾的試劑盒，使用本制品可以使平滑末端的DNA片段進(jìn)行TA克隆成為可能。與平滑末端的DNA片段克隆相比，TA克隆具有較高的克隆效率，可以大大提高實(shí)驗(yàn)的成功率。此外，本試劑盒中還含有A-Tailing Control Insert (500 bp) 和Blunting Control Insert (500 bp)，可以方便進(jìn)行Control實(shí)驗(yàn)。 |
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| ■ 保存 |
| -20℃。 |
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| ■ 用途 |
| 在平滑末端DNA片段的3’末端添加“A”尾后進(jìn)行TA克隆。 |
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| ■ 注意事項(xiàng) |
1. 為了提高加“A”反應(yīng)效率，用于加“A”反應(yīng)的末端平滑DNA片段應(yīng)進(jìn)行切膠回收的純化處理，盡量避免引物等其它雜質(zhì)的存在。切膠回收時(shí)可使用Takara凝膠回收試劑盒 (Code No.: 9762)。
2. 使用A-Tailing Control Insert進(jìn)行TA克隆時(shí)，可以檢測(cè)使用的T載體是否質(zhì)量可靠；使用Blunting Control Insert進(jìn)行TA克隆實(shí)驗(yàn)時(shí)，可以檢測(cè)本試劑盒的加“A”反應(yīng)性能。
3. 按照本實(shí)驗(yàn)操作進(jìn)行連接后，直接進(jìn)行轉(zhuǎn)化時(shí)的連接液不要超過(guò)20 μl。當(dāng)要轉(zhuǎn)化的DNA量較大或準(zhǔn)備進(jìn)行電轉(zhuǎn)化時(shí)，需對(duì)連接液進(jìn)行乙醇沉淀，純化DNA后再進(jìn)行轉(zhuǎn)化。進(jìn)行乙醇沉淀時(shí)使用Dr. GenTLE Precipitation Carrier (Code No.: 9094) 可以提高DNA的回收率。
4. 使用高效連接液Solution I 進(jìn)行連接反應(yīng)時(shí)請(qǐng)?jiān)?5℃以下進(jìn)行，溫度升高 (>26℃) 較難形成環(huán)狀DNA。連接效率偏低時(shí)，可適當(dāng)延長(zhǎng)連接反應(yīng)時(shí)間至數(shù)小時(shí)。 |
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頁(yè)面更新：2023-12-01 16:11:21
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