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| ■ 制品內(nèi)容 |
| E.coli JM109 Electro-Cells |
50 μl × 10 |
| pUC19 plasmid ( 10 pg/μl) |
10 μl |
| SOC Medium* |
1 ml × 10 |
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| *SOC Medium: 2% |
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Tryptone |
| 0.5% |
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Yeast extract |
| 10 mM |
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NaCl |
| 2.5 mM |
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KCl |
| 10 mM |
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MgSO4 |
| 10 mM |
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MgCl2 |
| 20 mM |
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Glucose |
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| ■ 制品說明 |
Electro-Cells是Takara Bio特別制備的適用于電穿孔法的制品。用高電壓脈沖電流瞬間擊穿細胞的細胞質(zhì)膜，從而使外源DNA轉(zhuǎn)入宿主細胞內(nèi)的轉(zhuǎn)化方法稱為電穿孔法。通過此種方法制備的感受態(tài)細胞轉(zhuǎn)化效率高、產(chǎn)量大，尤其適合在短時間內(nèi)將少量樣品轉(zhuǎn)入大腸桿菌內(nèi)。
由于E. coli JM109 Electro-Cells含有F' 質(zhì)粒，可以作為M13噬菌體載體的宿主細胞，也可用于制作DNA文庫或進行亞克隆。當轉(zhuǎn)化pUC載體或轉(zhuǎn)染M13噬菌體載體DNA時，重組體可以利用電轉(zhuǎn)化細胞的β-半乳糖苷酶的α-互補性，通過添加X-Gal和IPTG很容易地篩選出來。
X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside
IPTG : Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside |
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| ■ 細胞濃度 |
| >1×1010 bacteria/ml |
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| ■ Genotype |
| E. coli JM109： recA1 , endA1 , gyrA96 , thi -1 , hsdR17 (rk-mk+), e14-(mcrA- ) supE44 , relA1 , Δ (lac-proAB )/F'[traD36 , proAB+, lacIq, lacZ ΔM15]
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| ■ 保存 |
-80℃。
注意： -80℃或更低溫度下保存。如果保存溫度不能恒定，轉(zhuǎn)化降低將會降低。請使用附帶的pUC19 對照質(zhì)粒來確認保存細胞的轉(zhuǎn)化效率。不能液氮保存。 |
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| ■ 質(zhì)量標準 |
轉(zhuǎn)入10 pg 的pUC19，涂于含有Amp+ 的選擇培養(yǎng)基進行篩選。
轉(zhuǎn)化效率 : >1 x 109 cfu/μg pUC19 |
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| ■ 注意事項 |
1. 將Electro-Cells從-80℃取出后請立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
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| 2. 當使用50 μl Electro-Cells時，添加不多于10 ng的高純度樣品DNA。否則會降低轉(zhuǎn)化效率。 |
| 3. 導入分子量較大的DNA (＞7 kb) 時，轉(zhuǎn)化效率降低。 |
| 4. 當改變實驗規(guī)模時，適當改變反應(yīng)條件。 |
| 5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培養(yǎng)基。此時，轉(zhuǎn)化效率可能會降低。 |
| ·L-broth : |
Ingredient |
per liter water |
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Tryptone |
10 g |
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Yeast extract |
5 g |
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NaCl |
5 g |
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| 用1 N NaOH調(diào)整pH7.5并高壓滅菌。 |
| ·φ b-broth: |
Ingredient |
per liter water |
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Tryptone |
20 g |
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Yeast extract |
5 g |
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MgSO4·7H2O |
5 g |
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| 用1 N KOH調(diào)整pH7.5并高壓滅菌。 |
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| 6. 稀釋時，使用“使用方法4”中加入的SOC培養(yǎng)基。 |
| 7. YT soft agar: |
Ingredient |
per 100 ml water |
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Tryptone |
0.8 g |
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Yeast extract |
0.5 g |
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NaCl |
0.5 g |
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| 用1 N NaOH調(diào)整pH7.6，添加agar至濃度為0.6%，高壓滅菌。 |
| 8. 制備感受態(tài)細胞。當DNA插入M13噬菌體載體克隆位點時，重組體可通過在YT-soft agar添加X-Gal 和IPTG進行篩選，因為非重組體存在于藍斑中。 |
| 9. YT-plate: |
Ingredient |
per liter water |
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Tryptone |
8 g |
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Yeast extract |
5 g |
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NaCl |
5 g |
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| 用1 N NaOH調(diào)整pH7.6，添加agar至濃度為1.5%，高壓滅菌。 |
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| 10. 當加入X-Gal或IPTG時，按照以下方法操作： |
| ·加入100 mM IPTG，100 μl-300μl IPTG/100 ml agar medium 和 25 μl IPTG /3 ml soft agar。 |
| ·加入20 mg/ml X-Gal（溶解于二甲基甲酰胺）到agar medium中，比例為200 μl-300 μl /100 ml。若使用 soft agar，比例為50 μl/3 ml。 |
| 11. 不建議將解凍的感受態(tài)細胞再次冷凍保存。但是，如果再次凍結(jié)不可避免，將細胞置于干冰/乙醇中快速冷凍，置于-80℃保存。但是，轉(zhuǎn)化效率可能會降低至少一個數(shù)量級。 |
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京公網(wǎng)安備 110114000405號
物純化（灰）.png)
化感受態(tài)細胞（黃）.png)
