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■ 制品內(nèi)容 |
| E.coli JM109 Competent Cells |
100 μl × 10 |
| pBR322 plasmid ( 0.1 ng/μl) |
10 μl |
| SOC Medium* |
1 ml × 10 |
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| *SOC Medium: 2% |
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Tryptone |
| 0.5% |
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Yeast extract |
| 10 mM |
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NaCl |
| 2.5 mM |
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KCl |
| 10 mM |
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MgSO4 |
| 10 mM |
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MgCl2 |
| 20 mM |
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Glucose |
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| ■ 制品說明 |
Takara在Hanahan's method基礎(chǔ)上進行了改良，制備出E.coli JM109 Competent Cells。
由于E. coli JM109 Competent Cells含有F' 質(zhì)粒，可以作為M13噬菌體載體的宿主細胞，也可用于制作DNA文庫或進行亞克隆。當轉(zhuǎn)化pUC載體或轉(zhuǎn)染M13噬菌體載體DNA時，重組體可以利用感受態(tài)細胞的β-半乳糖苷酶的α-互補性，通過添加X-Gal和IPTG很容易地篩選出來。
X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside
IPTG : Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside |
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| ■ 細胞濃度 |
| 1-2×109 bacteria/ml |
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| ■ Genotype |
| E. coli JM109： recA1 , endA1 , gyrA96 , thi-1 , hsdR17 (rk-mk+), e14-(mcrA- ) supE44 , relA1 , Δ(lac-proAB )/F'[traD36 , proAB+, lacIq, lacZΔM15]
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| ■ 保存 |
-80℃。
注意： 如果不在-80℃下保存，轉(zhuǎn)化效率將會降低。此時，在使用前，請使用附帶的pBR332 對照質(zhì)粒來確認細胞的轉(zhuǎn)化效率。不能液氮保存。 |
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| ■ 轉(zhuǎn)化效率 |
轉(zhuǎn)入1 ng 的pBR322，涂于含有Amp+ 的選擇培養(yǎng)基進行篩選。
轉(zhuǎn)化效率 : >1 x 108 transformants/μg pBR322 |
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| ■ 注意事項 |
1. 將感受態(tài)細胞從-80℃冷凍取出后請立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
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| 2. 可使用1.5 ml的microcentrifuge tubes代替14 ml的圓底tubes (BD company Code: 352059 或 352057等)，但效率可能會降低。 |
| 3. 當使用100 μl感受態(tài)細胞時，加入的高純度DNA樣品不超過10 ng。否則轉(zhuǎn)化效率會降低。 |
| 4. 當改變感受態(tài)細胞數(shù)量或tubes類型時，適當調(diào)整反應(yīng)條件。例如，當使用1.5 ml microcentrifuge tubes時，42℃放置60秒，而不是45秒。 |
| 5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培養(yǎng)基。此時，轉(zhuǎn)化效率可能會降低。 |
| ·L-broth : |
Ingredient |
per liter water |
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Tryptone |
10 g |
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Yeast extract |
5 g |
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NaCl |
5 g |
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| 用1 N NaOH調(diào)整pH7.5并高壓滅菌。 |
| ·φ b-broth: |
Ingredient |
per liter water |
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Tryptone |
20 g |
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Yeast extract |
5 g |
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MgSO4·7H2O |
5 g |
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| 用1 N KOH調(diào)整pH7.5并高壓滅菌。 |
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| 6. YT soft agar: |
Ingredient |
per 100 ml water |
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Tryptone |
0.8 g |
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Yeast extract |
0.5 g |
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NaCl |
0.5 g |
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| 用1 N NaOH調(diào)整pH7.6，添加agar至濃度為0.6%，并高壓滅菌。 |
| 7. 制備宿主細胞。 |
| 8. L-plate: |
Ingredient |
per liter water |
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Tryptone |
10 g |
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Yeast extract |
5 g |
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NaCl |
5 g |
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| 用1 N NaOH調(diào)整pH到7.5，加入agar至濃度為1.5%，并高壓滅菌。 |
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| 9. 當加入X-Gal或IPTG時，按照以下方法操作： |
| ·將100 mM IPTG按100-300 μl/100 ml的比例加入到agar medium 中，若使用soft agar，比例為 25 μl/3 ml。 |
| ·將20 mg /ml X-Gal（溶解于二甲基甲酰胺）按200-300 μl/100 ml的比例加入到agar medium中，若使用soft agar，比例為50 μl/3 ml。 |
| 10. 不建議將解凍的感受態(tài)細胞再次冷凍保存。但是，如果再次凍結(jié)不可避免，將細胞置于干冰/乙醇中快速冷凍，置于-80℃保存。但是，轉(zhuǎn)化效率可能會降低至少一個數(shù)量級。 |
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京公網(wǎng)安備 110114000405號
物純化（灰）.png)
化感受態(tài)細胞（黃）.png)
