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產(chǎn)品選擇指南

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絲狀真菌原生質(zhì)體制備酶Yatalase
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價(jià)格（元） 說明書 數(shù)量
OZK T017 Yatalase 2 g ￥2,611
 
■ 制品說明
本制品是從Corynebacterium sp. OZ-21培養(yǎng)上清液中制備而來的復(fù)合酶。
◇ 具有良好的熱穩(wěn)定性
◇ 具有Chitinase、Chitobiase酶活性
◇ 可制備絲狀真菌的原生質(zhì)體
對(duì)于一些難處理的黑曲霉等絲狀真菌，建議使用Yatalase -Plus-（Code No. T030）
 
■ 保存
4℃，干燥條件。
 
■ 形態(tài)
干粉（含乳糖作為輔料）
 
■ 酶活性
Chitinase活性： 50 U/g powder 以上
Chitobiase活性：500 U/g powder 以上
細(xì)胞壁溶解活性： 約10,000 U/g powder
 
■ 起源
Corynebacterium sp. OZ-21
 
■ Chitinase活性測(cè)定
活性定義：在下述條件下，1分鐘釋放1 μmol的游離N –Acetylglucosamine所需要的酶量定義為1 U。
測(cè)定方法：
試劑A：醋酸緩沖液
  在90 ml 蒸餾水中溶解0.82 g的醋酸鈉。在溶液中逐次少量加入醋酸調(diào)節(jié)pH至6.0。定容至100 ml，該溶液即為0.1 M醋酸緩沖液。
試劑B：基質(zhì)液
  在A液中加入0.5％的Chitin制成基質(zhì)液。
試劑C：酶液
  加蒸餾水溶解使其終濃度為0.8 mg/ml。
操作步驟
1. 在L型實(shí)驗(yàn)管中加入1 ml 試劑B，37℃孵育5～10分鐘。
2. 添加0.2 ml試劑C后，37℃輕柔振蕩反應(yīng)1小時(shí)。
3. 加熱失活（煮沸5分鐘）后，3,000 rpm離心10分鐘，通過Reissig法測(cè)定上清中的N-Acetylglucosamine的量。
4. 通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出酶反應(yīng)釋放的游離N-Acetylglucosamine量。
 
■ Chitobiase活性測(cè)定
活性定義：在下述條件下，1分鐘釋放1 μmol游離的p-Nitrophenol所需的酶活性定義為1 U。
測(cè)定方法：
試劑A：MclLvaine緩沖液
  0.1 M檸檬酸（檸檬酸2.1 g溶解于蒸餾水中定容至100 ml）中加入0.2 M磷酸氫二鈉溶液（十二水合磷酸氫二鈉10.74 g溶解于蒸餾水中定容至150 ml）并調(diào)整pH為6.0。
試劑B：基質(zhì)液
  將8.56 mg p-Nitrophenyl-N-acetyl-β-D-glucosaminide 添加到5.0 ml A液中使其溶解。
試劑C：酶液
  加蒸餾水溶解使其終濃度為0.8 mg/ml。
試劑D：反應(yīng)停止液
  碳酸鈉（無水）2.65 g 加蒸餾水溶解后定容至100 ml。
 
操作步驟
1. L型反應(yīng)管中添加0.75 ml試劑A和0.2 ml試劑B，37℃孵育5～10分鐘。
2. 加入50 μl試劑C，迅速將反應(yīng)管混勻后開始反應(yīng)。
3. 10分鐘輕柔振蕩后，添加2.0 ml試劑D，迅速混勻后，在405 nm測(cè)定吸光度。
4. 通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算酶反應(yīng)釋放出的游離p-Nitrophenol的量。
 
■ 細(xì)胞壁溶解活性測(cè)定
活性定義：在下述條件下，1小時(shí)內(nèi)引起溶液于660 nm處吸光度減少1％時(shí)所需的酶量定義為1 U。
測(cè)定方法：
試劑A：基質(zhì)液
  收集Aspergillus oryzae菌體（Dextrin-Peptone培養(yǎng)基，25～30℃培養(yǎng)1-2天）并使用Waring攪拌器勻漿（16,000 rpm，3 min）。之后使用French press（弗氏壓碎器）將菌體壓成碎片，在濾紙上充分水洗后，再使用丙酮和乙醚洗滌。風(fēng)干沉淀后添加0.1 M醋酸緩沖液（pH6.0）將其溶解成終濃度為0.125%(w/v)的懸濁液，此為基質(zhì)液。
試劑B：酶液
  加蒸餾水溶解使其終濃度為0.8 mg/ml。
 
操作步驟
1. 反應(yīng)管中加入4 ml試劑A。
2. 添加1 ml 試劑B后，迅速混勻，于37℃輕柔振蕩培養(yǎng)1小時(shí)。
3. 迅速檢測(cè)660 nm波長(zhǎng)下溶液的吸光度。
 
■ 一般性質(zhì)
最適pH : pH7.2
最適溫度 : 37℃
 
 
表1：各種酶活性
酶 活性（U/g powder）
Chitinase ＞50
Chitobiase ＞500
Chitosanase* 19
β-1,3-Glucanase* 300
Protease* 31
細(xì)胞壁溶解活性 10,000
* Chitosanase、β-1,3-Glucanase、Protease的值為代表性的樣品值，不是標(biāo)準(zhǔn)值。
 
本制品由Ozeki corporation制造。
 
 

頁(yè)面更新：2024-01-25 15:00:10

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