腺相關(guān)病毒載體（AAV載體）能夠?qū)⒒驅(qū)胫猎鲋臣毎头窃鲋臣毎?，尤其在非分裂細胞中可以實現(xiàn)長期表達。此外，由于它具有低免疫原性，適用于動物個體基因?qū)搿．斒褂肁AV載體進行動物個體基因?qū)霑r，使用高純度的病毒粒子是很有必要的，需要去除源自病毒包裝細胞和培養(yǎng)基的雜質(zhì)。將基因?qū)胫僚囵B(yǎng)細胞時，使用純化后的AAV粒子可以消除雜質(zhì)所帶來的影響。
AAV粒子的純化通常使用CsCl密度梯度超速離心法或碘克沙醇超速離心法，但這兩種方法不僅需要熟練的操作手法，同時還存在耗時長和回收率低等問題。
AAVpro Purification Kit (All Serotypes)可以在大約4個小時內(nèi)簡便有效地從AAV粒子制備細胞中純化出AAV粒子，適用于各種血清型（Serotype）。該試劑盒使用了特別的AAV粒子提取方法，省去了凍融和超聲破碎等繁瑣操作；特別的AAV載體純化方法，通過簡單的操作即可有效去除雜質(zhì)。AAVpro Purification Kit Maxi（All Serotypes）用于從5個T225培養(yǎng)瓶的包裝細胞中純化AAV粒子，AAVpro Purification Kit Midi（All Serotypes）用于從1個T225培養(yǎng)瓶的包裝細胞中純化AAV粒子，兩個試劑盒所包含的緩沖液和濃縮柱均為4次純化用量。 |
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隨著AAVpro Purification Kit Midi（All Serotypes）（Code No. 6675）的發(fā)布，我們變更了原AAVpro Purification Kit（All Serotypes）（Code No. 6666）的產(chǎn)品名稱。從批次Lot No. AK21409A和Lot No. AK21411A開始，Code No. 6666的產(chǎn)品名稱將由AAVpro Purification Kit（All Serotypes）更改為AAVpro Purification Kit Maxi（All Serotypes）。除了產(chǎn)品名稱之外，該試劑盒的性能、組分、價格、包裝量、操作步驟等都沒有發(fā)生變更。
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| ■ 保存 |
Cryonase Cold-active Nuclease：－20℃
其他組份：室溫
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| ■ 特點 |
· 適用于各種AAV血清型。
· 高純度、高回收率。
· 特別的AAV載體提取方法，省去了凍融和超聲破碎等繁瑣操作。
· 特別的AAV載體純化方法，通過簡單的操作即可有效去除雜質(zhì)。
· 無需進行超離心等繁瑣操作。
· 附帶從病毒包裝細胞中純化AAV粒子所必需的所有試劑。
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| ■ 實驗操作流程圖 |
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| 使用AAVpro Purification Kit （All Serotypes） 純化AAV粒子的操作概略圖 |
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| ■ 實驗例 |
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| 圖1. 使用AAVpro Purification Kit Maxi (All Serotypes)純化不同血清型AAV粒子，測定其純度。制備攜帶綠色熒光蛋白質(zhì)ZsGreen1的不同血清型AAV病毒粒子，每種血清型病毒粒子均以5個T225培養(yǎng)瓶培養(yǎng)的包裝細胞進行制備。使用該試劑盒分別進行純化，之后使用AAVpro Titration Kit (for Real Time PCR) Ver.2（Code No. 6233）測定病毒滴度，并以1×109 vector genomes/泳道進行SDS-PAGE。SDS-PAGE結(jié)果顯示，對于本次檢測的所有血清型病毒粒子，觀察到的主要條帶均為AAV衣殼蛋白質(zhì)（VP1，VP2和VP3）。 |
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| 圖2. 使用AAVpro Purification Kit Maxi (All Serotypes) 純化不同血清型AAV粒子，評估其感染能力。不同血清型AAV粒子純化后，感染不同細胞類型，評估其感染性。將純化后攜帶綠色熒光蛋白質(zhì)ZsGreen1的AAV粒子，以5,000 vector genomes/細胞（1、2、3、6型血清型）或50,000 vector genomes/細胞（5型血清型）分別感染CHO、RD、HT1080細胞，感染3天后使用流式細胞儀進行分析。結(jié)果表明，使用該試劑盒純化的AAV粒子能夠成功感染本次測試的細胞類型。 |
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