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機(jī)構(gòu)用戶解決方案

產(chǎn)品選擇指南

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自動化高通量的單細(xì)胞人T細(xì)胞受體分析
品牌	Code No.	產(chǎn)品名稱	包裝量	價格（元）	說明書	數(shù)量
Clontech	640200	ICELL8^® cx TCR Chip	1 Chip	詢價
Clontech	640179	ICELL8^® Human TCR a/b Profiling - Indexing Primer Set	1 Chip	詢價
Clontech	640180	ICELL8^® Human TCR a/b Profiling - Indexing Primer Set	5 Chips	詢價
Clontech	640181	ICELL8^® Human TCR a/b Profiling - Indexing Primer Set	10 Chips	詢價
Clontech	640182	ICELL8^® Human TCR a/b Profiling Reagent Kit	Each	詢價
Clontech	640212	ICELL8^® Collection Kit - L	1 Pkg	詢價
Clontech	640197	ICELL8^® cx Loading Kit	1 Pkg	詢價
Clontech	640192	ICELL8^® 384-Well Source Plate and Seal (5/pack)	Each	詢價

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高通量地闡明單細(xì)胞中T細(xì)胞受體Alpha-Beta鏈多樣性

· 靈敏性更高：基于RACE技術(shù)保證低豐度TCR變體的檢出
· 特異性更強(qiáng)：獲得全長reads，目的reads占比高，更正確的配對信息
· 5’端捕獲測序差異表達(dá)分析：通過比對5’末端信息，產(chǎn)生所有轉(zhuǎn)錄本差異表達(dá)數(shù)據(jù)
· 靈活、高通量的單細(xì)胞分析：單次實(shí)驗(yàn)同時分析8個樣品，生成上千單細(xì)胞的測序數(shù)據(jù)

■ 應(yīng)用領(lǐng)域

· 人單細(xì)胞TCR庫分析（TCRα和TCRβ克隆型）
· 5’端差異表達(dá)分析

■ 產(chǎn)品說明

Takara Bio高通量TCR免疫組庫解決方案應(yīng)用SMART技術(shù)(Switching Mechanism at 5’End of RNA Template)和基于5’RACE的方法，用于捕獲由ICELL8 cx Single-Cell System（Code No. 640188）分選得到的上千“活的單細(xì)胞”的TCR轉(zhuǎn)錄本完整V(D)J可變區(qū)域。產(chǎn)生的文庫可同時提供α鏈和β鏈的多樣性信息。
實(shí)驗(yàn)流程中，cDNA擴(kuò)增階段整合了Illumina特異的接頭序列，產(chǎn)生的文庫帶有index接頭，可直接用于Illumina平臺測序。Takara Bio高通量TCR免疫組庫解決方案也可以同時支持5’末端差異表達(dá)分析。
在ICELL8 cx單細(xì)胞分選系統(tǒng)上，與單個T細(xì)胞一起被分注到TCR芯片（Code No. 640200）上的還有陽性對照和陰性對照。每個TCR芯片含有5,184個納升級微孔，預(yù)制了1,728種Barcode，每個Barcode在芯片上被預(yù)制3次。使用CellSelect軟件鑒定出具有“活的單細(xì)胞”微孔后，SMART RT-PCR試劑將被分注到含“活單細(xì)胞”的微孔中，用于后續(xù)分析。連接了Barcode序列的cDNA繼續(xù)在微孔芯片上完成PCR擴(kuò)增。接下來，從芯片中將連接好Barcode序列的擴(kuò)增產(chǎn)物集中收集，并進(jìn)行純化。純化后的cDNA作為第一輪TCR特異性PCR的模板，而第一輪TCR特異性PCR的產(chǎn)物作為第二輪TCR特異性PCR的模板，并整合Illumina index序列引物。

■ 產(chǎn)品組分

完整的工作流程需要下列Takara Bio產(chǎn)品。請參考User Manual得到一份完整的試劑耗材清單：

用于ICELL8 cx Single-Cell System

· ICELL8 cx TCR Chip (Code No. 640200)
· ICELL8 Human TCR a/b Profiling Reagent Kit (Code No. 640182)
· ICELL8 Human TCR a/b Profiling Indexing Primer Set (Code No. 640179, 640180, 640181)*
· ICELL8 Collection Kit-L (Code No. 640212)
· ICELL8 cx Loading Kit (Code No. 640197)

User Manual：ICELL8^® cx Human TCR a/b Profiling user Manual

*NOTE：Code No. 640179包含的Primer量足夠1張芯片使用，若實(shí)驗(yàn)中需要使用多張芯片，請購買合適的indexing primer set。640180適用于5張芯片的實(shí)驗(yàn)，640181適用于10張芯片的實(shí)驗(yàn)。

圖1 ICELL8 Human TCR a/b Profiling技術(shù)原理流程圖

圖2 ICELL8 Human TCR a/b Profiling實(shí)驗(yàn)流程圖

使用ICELL8單細(xì)胞分選系統(tǒng)對T細(xì)胞和PBMCs樣品進(jìn)行單細(xì)胞分選及后續(xù)單細(xì)胞TCR克隆型分析（圖3）和5’端差異表達(dá)分析（圖4）。

圖3. T細(xì)胞與PBMCs的克隆型read計數(shù) 使用Excel對MiXCR軟件輸出結(jié)果進(jìn)行篩選，為大于陰性對照（1X PBS）的TCRa和TCRb克隆類型定義一個read閾值（綠色實(shí)線為閾值線，對應(yīng)read計數(shù)值為8）。數(shù)據(jù)使用統(tǒng)計軟件JMP進(jìn)行分析，并將結(jié)果繪制成箱圖。圖中點(diǎn)代表一個細(xì)胞中的TCRa（藍(lán)色）和TCRb（紅色）克隆型。陰性對照用于閾值設(shè)定，以便對分析樣品和NTC（或低read克隆型）進(jìn)行區(qū)分。Negative control 15個，Positive control 15個，T cells 530個，PBMCs 590個。

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圖4. T細(xì)胞與PBMCs的5’端差異表達(dá)分析使用與圖3相同來源的cDNA進(jìn)行單細(xì)胞5’端差異表文庫構(gòu)建，評估每個Barcode獲得的reads數(shù)。箱圖中每個點(diǎn)代表一個指定細(xì)胞中檢測到的reads數(shù)。文庫測序由NextSeq^® 550測序平臺完成，每個細(xì)胞產(chǎn)生平均30K reads。在PBMCs和T細(xì)胞中平均檢測到～1,150個基因。Negative control 15個，Positive control 15個，T cells 530個，PBMCs 590個。

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■ 參考文獻(xiàn)

Litjens, Nicolle H. R., et al. Validation of a combined transcriptome and T cell receptor Alpha/Beta (TRA/TRB) repertoire assay at the single cell level for paucicellular samples. Front. Immunol., 11, (2020)

產(chǎn)品詳情請點(diǎn)擊：

視頻資料:《ICELL8系統(tǒng)T細(xì)胞受體測序（TCR-Seq）解決方案》

頁面更新：2021-11-15 11:34:32

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