| 上新啦，SARS-CoV-2假病毒包裝系統(tǒng)！ |
| 在2019年起始的這場(chǎng)新型冠狀病毒感染的肺炎疫情中，生命科學(xué)和生物醫(yī)藥領(lǐng)域的多個(gè)團(tuán)隊(duì)迅速投身于疫情防控和診斷治療中，在病毒溯源、傳播途徑、快速檢測(cè)方法和試劑、重癥病人治療方案優(yōu)化、疫苗快速研發(fā)等領(lǐng)域貢獻(xiàn)了智慧和力量。Takara Bio為研究新型冠狀病毒的科研人員和IVD企業(yè)提供解決方案，提供高效的檢測(cè)、純化、測(cè)序、克隆、基因組編輯和免疫分析。 2019新冠病毒被命名為SARS-CoV-2，新冠肺炎被命名為是COVID-19。在開(kāi)發(fā)COVID-19療法的過(guò)程中，其中一個(gè)常見(jiàn)步驟就是要證明該療法對(duì)SARS-CoV-2病毒的感染具有抑制作用。然而處理真正的SARS-CoV-2病毒需要更為嚴(yán)苛的安全條件，生物安全防護(hù)水平為3級(jí)，這比處理慢病毒的生物安全防護(hù)水平還要高一級(jí)?；诎踩胧┛紤]，目前研究人員大多使用帶有SARS-CoV-2刺突蛋白（spike protein）的假病毒（Ni et al. 2020, Shang et al. 2020）替代SARS-CoV-2病毒開(kāi)展COVID-19療法相關(guān)研究。 SARS-CoV-2假病毒目前已被應(yīng)用于新冠疫苗開(kāi)發(fā)研究。為了確保疫苗的有效性，使用SARS-CoV-2假病毒開(kāi)展中和試驗(yàn)，以確定接種受試者的抗血清是否能抑制SARS-CoV-2假病毒的感染。除了疫苗開(kāi)發(fā)之外，SARS-CoV-2假病毒也被用于抗體藥物開(kāi)發(fā)研究中：通過(guò)中和試驗(yàn)，驗(yàn)證候選抗體是否可以抑制SARS-CoV-2假病毒的感染。當(dāng)然，也可以用于基礎(chǔ)研究，比如可以用于比較SARS-CoV-2和SARS-CoV病毒刺突蛋白的功能。 |
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| —————— SARS-CoV-2假病毒包裝系統(tǒng) —————— |
| 關(guān)于SARS-CoV-2假病毒的包裝制備，目前主要是借助現(xiàn)有的慢病毒包裝系統(tǒng)，優(yōu)化改進(jìn)后用于包裝制備SARS-CoV-2假病毒。根據(jù)科學(xué)家們的研究，新冠病毒主要依靠病毒表面的刺突蛋白，也就是S蛋白，通過(guò)與人體細(xì)胞表面受體ACE2的結(jié)合入侵人體，所以我們把慢病毒包裝系統(tǒng)中的包膜蛋白表達(dá)載體替換成為S蛋白表達(dá)載體，包裝制備出包膜蛋白為S蛋白的SARS-CoV-2假慢病毒，替代SARS-CoV-2病毒開(kāi)展研究。 Takara新推出的SARS-CoV-2假病毒包裝系統(tǒng)很有技術(shù)亮點(diǎn)。它由5個(gè)獨(dú)立組件組成，并且5個(gè)組件按照特定的優(yōu)化比例混合，提高了病毒包裝性能。在這個(gè)包裝系統(tǒng)中，gag，pol和env基因被分離開(kāi)來(lái)，可以進(jìn)一步降低RCL（復(fù)制型慢病毒）產(chǎn)生的概率。事實(shí)上，有文獻(xiàn)報(bào)道，使用這種方法并沒(méi)有檢測(cè)到RCL（復(fù)制型慢病毒）的出現(xiàn)（Wu et al., 2000）。這些改進(jìn)顯著提高了這款包裝系統(tǒng)的生物安全性。在病毒滴度方面，pol基因與vpr基因的融合可以確保反轉(zhuǎn)錄酶/整合酶蛋白質(zhì)能夠轉(zhuǎn)運(yùn)到重組慢病毒粒子中，從而確保每病毒粒子中包含更多的反轉(zhuǎn)錄酶和整合酶，確保更高的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率和整合效率。在這個(gè)包裝系統(tǒng)中，還包含了Tet-Off和tat反式激活因子，可以驅(qū)動(dòng)病毒必需成分高水平表達(dá)，產(chǎn)生誘導(dǎo)級(jí)聯(lián)表達(dá)反應(yīng)，從而可以制備出高滴度SARS-CoV-2假病毒。而在第三代慢病毒包裝系統(tǒng)中，通常gag和pol序列是不分離的，也沒(méi)有使用反式激活級(jí)聯(lián)機(jī)制。應(yīng)用數(shù)據(jù)顯示，轉(zhuǎn)導(dǎo)ACE2-HEK293T細(xì)胞所產(chǎn)生的功能滴度可達(dá)到為107-108 IFU/ml。 為了方便使用，這款包裝系統(tǒng)打破了傳統(tǒng)形式，采用了預(yù)混的凍干粉形式。將慢病毒包裝質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染試劑預(yù)混后進(jìn)行預(yù)分裝和凍干處理，所以不再額外需要添加轉(zhuǎn)染試劑。對(duì)于研究人員來(lái)說(shuō)，操作非常簡(jiǎn)便，一管一個(gè)反應(yīng)，只需要一步操作流程：那就是只需加入您選擇的慢病毒表達(dá)質(zhì)粒就可以了。這種包裝形式還可以在很大程度上降低操作誤差，確保不同樣品和批次間的一致性。 |
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| —————— 完善的后續(xù)配套支持 —————— |
| ★ 基于ELISA的滴度測(cè)定方法 |
| Lenti-X p24 Rapid Titer Kit適用于檢測(cè)基于HIV-1慢病毒載體的上清液滴度。該試劑盒可以特異性檢測(cè)p24衣殼蛋白質(zhì)，通過(guò)與p24標(biāo)準(zhǔn)品制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線相比較，就可以獲得檢測(cè)樣品的病毒滴度。 |
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| ★ 基于qRT-PCR方法的滴度測(cè)定方法 |
| Lenti-X qRT-PCR Titration Kit該試劑盒通過(guò)qRT-PCR方法檢測(cè)上清液中的病毒基因組拷貝數(shù)，快速測(cè)定慢病毒滴度。將樣品和試劑盒中提供的標(biāo)準(zhǔn)品RNA進(jìn)行梯度稀釋，然后分別進(jìn)行qRT-PCR反應(yīng)后繪制曲線。通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)曲線的Ct值比較，就可以獲得樣品所包含的病毒拷貝數(shù)。 |
| ★ 10分鐘智能化滴度測(cè)定方法 |
| Lenti-X GoStix plus作為一種智能化檢測(cè)手段，將慢病毒驗(yàn)毒棒和一款簡(jiǎn)便的手機(jī)APP相結(jié)合使用，通過(guò)檢測(cè)慢病毒p24蛋白質(zhì)可快速定量測(cè)定慢病毒滴度，而且檢測(cè)樣品僅需20 μl，更節(jié)約樣品用量。 |
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| ★ 方便使用的轉(zhuǎn)導(dǎo)滴度測(cè)定方法 |
| Lenti-X Provirus Quantitation Kit采用qPCR方法快速測(cè)定轉(zhuǎn)導(dǎo)后的靶細(xì)胞中整合的慢病毒的拷貝數(shù)（前病毒）。通過(guò)測(cè)定靶細(xì)胞中前病毒的拷貝數(shù)，可以確定有效的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)滴度，從而更加有效地感染靶細(xì)胞。 |
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| ★ 簡(jiǎn)便快速高效的濃縮方法 |
| 如果檢測(cè)后病毒滴度偏低，需要濃縮后再轉(zhuǎn)導(dǎo)靶標(biāo)細(xì)胞，以提高實(shí)驗(yàn)成功率。超速離心方法是常規(guī)使用的慢病毒濃縮方法，但這種方法受限于設(shè)備、時(shí)間和任務(wù)量等因素。Lenti-X Concentrator是一款無(wú)需超速離心操作的濃縮試劑，可簡(jiǎn)單、快速、高效地濃縮慢病毒上清液，濃縮過(guò)程大約1小時(shí)可完成，濃縮倍數(shù)可高達(dá)100倍，回收率高達(dá)90%。整個(gè)操作流程非常簡(jiǎn)單，濃縮規(guī)模可按照需求擴(kuò)大或者縮小，而不受病毒量、病毒滴度和需要濃縮的起始體積的限制。 |
| ★ 基于重力流的純化方法 |
| Lenti-X Maxi Purification Kit可從病毒上清液中純化出高產(chǎn)量、高純度的慢病毒。這種基于重力流的純化系統(tǒng)，操作簡(jiǎn)單、快速、高效，且純化效果優(yōu)于基于注射器的純化系統(tǒng)，因?yàn)楹笳邥?huì)損傷脆弱的病毒顆粒并降低產(chǎn)量。整個(gè)操作過(guò)程就像純化質(zhì)粒一樣簡(jiǎn)單。 |
頁(yè)面更新：2021-04-30 15:43:23
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