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Lenti-X Provirus Quantitation Kit可以讓您快速確定轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞混合或克隆群體中存在的整合慢病毒(前病毒)的拷貝數(shù)。該試劑盒包括用于測定前病毒拷貝數(shù)的引物、基因組DNA純化試劑盒、制備標(biāo)準(zhǔn)曲線的對照DNA，以及基于TB Green檢測的qPCR試劑（可檢測200次）。
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| 正確確定慢病毒的有效滴度 |
通過量化已整合到靶細(xì)胞核DNA中的慢病毒的數(shù)量，您可以正確確定慢病毒上清液原液的真實(shí)滴度（即有效滴度）。利用這個(gè)信息，可以用正確的MOI（感染復(fù)數(shù)）去感染細(xì)胞，讓您能夠預(yù)測將有多少病毒基因組會整合到細(xì)胞中。您也可以使用此方法來校準(zhǔn)其他滴定方法，那些方法可以測量包裝細(xì)胞上清液中的病毒含量，但不能測定靶細(xì)胞中的功能性整合滴度。
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| 一致并且可預(yù)測的慢病毒轉(zhuǎn)基因表達(dá) |
當(dāng)使用慢病毒載體將基因?qū)胫涟屑?xì)胞時(shí)，表達(dá)水平會隨著MOI的增加而增加，因?yàn)楦嗟穆《究截悤系郊?xì)胞核DNA中。同樣，對于給定的病毒制劑，在不同目標(biāo)細(xì)胞系中的有效MOI可能會因各個(gè)細(xì)胞系對慢病毒感染的敏感度不同而不同。Lenti-X Provirus Quantitation Kit可讓您評估任何細(xì)胞系中的轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)果，而不受表達(dá)水平的影響，并且可確保不同細(xì)胞系間或使用不同病毒制劑間轉(zhuǎn)導(dǎo)水平一致。
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| ■ 概述/特點(diǎn) |
· 預(yù)測不同實(shí)驗(yàn)間一致的轉(zhuǎn)基因表達(dá)水平
· 比較多個(gè)細(xì)胞系的轉(zhuǎn)導(dǎo)數(shù)據(jù)
· 確保不同實(shí)驗(yàn)或不同細(xì)胞系之間的拷貝數(shù)一致
· 包含純化10種基因組DNA和進(jìn)行200 次TB Green qPCR反應(yīng)試劑*
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* 此試劑盒中包含的引物旨在擴(kuò)增HIV-1基因組包裝信號附近的的保守區(qū)域。這些引物與Takara Bio銷售的所有慢病毒載體和常用的慢病毒載體相兼容。如果不能確定該試劑盒是否與您的載體相兼容，請將您的載體序列發(fā)送至service@takarabiomed.com.cn，我們的技術(shù)支持團(tuán)隊(duì)將很樂意為您確認(rèn)引物的兼容性。
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| ■ 實(shí)驗(yàn)例 |
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圖1. 測定靶細(xì)胞中整合的慢病毒拷貝數(shù)。使用快速qPCR方法確定前病毒含量。
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圖2. 慢病毒前病毒拷貝數(shù)會影響轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞中轉(zhuǎn)基因的表達(dá)水平。使用AcGFP1慢病毒表達(dá)載體分別以高或低MOI感染HT1080細(xì)胞。感染后72小時(shí)，對細(xì)胞進(jìn)行嘌呤霉素藥物選擇。一周后，選擇穩(wěn)定轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞克隆進(jìn)行擴(kuò)增和表達(dá)分析。使用流式細(xì)胞術(shù)確定AcGFP1的表達(dá)水平，并使用Lenti-X Provirus Quantitation Kit確定基因組DNA中的前病毒含量。該圖所示數(shù)據(jù)為低拷貝數(shù)（> 3; n = 8）和高拷貝數(shù)（> 9; n = 7）實(shí)驗(yàn)組兩組合并數(shù)據(jù)。結(jié)果表明，前病毒含量越高，表達(dá)水平也就越高。
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圖3. 等量病毒感染細(xì)胞時(shí)，不同類型細(xì)胞獲得的前病毒（整合的慢病毒）拷貝數(shù)不同。 用等量的單一慢病毒原液（100 μl）感染HT1080、HeLa和HEK 293細(xì)胞。感染后72小時(shí)，使用嘌呤霉素對細(xì)胞進(jìn)行藥物選擇。一周后，使用Lenti-X Provirus Quantitation Kit確定穩(wěn)定轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞群的前病毒拷貝數(shù)。
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京公網(wǎng)安備 110114000405號
/慢病毒包裝系統(tǒng)（灰）.png)
/293T包裝細(xì)胞（灰）.png)
/慢病毒滴度測定（黃）.png)
/慢病毒濃縮（灰）.png)
/慢病毒純化（灰）.png)
/轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)（灰）.png)
/整合位點(diǎn)檢測（灰）.png)