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■ 制品內(nèi)容 |
| E.coli HST08 Premium Competent Cells |
100 μl × 10 |
| pUC19 plasmid (0.1 ng/μl) |
10 μl |
| SOC Medium* |
1 ml × 10 |
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| *SOC Medium: 2% |
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Tryptone |
| 0.5% |
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Yeast extract |
| 10 mM |
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NaCl |
| 2.5 mM |
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KCl |
| 10 mM |
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MgSO4 |
| 10 mM |
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MgCl2 |
| 20 mM |
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Glucose |
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| ■ 制品說明 |
Takara在Hanahan's method基礎(chǔ)上進(jìn)行了改良，制備出具有很高轉(zhuǎn)化效率的E. coli HST08 Premium Competent Cells。另外，E.coli HST08是mrr, hsdRMS, mcrBC, mcrA (這些基因是大腸桿菌切除外源甲基化DNA所必需的基因) 缺失的菌株，這使得其可廣泛應(yīng)用于甲基化質(zhì)粒的制備、基因文庫的制作以及亞克隆。當(dāng)和較大質(zhì)粒一起使用時(shí)，也可維持較高轉(zhuǎn)化效率和菌落生長(zhǎng)率*。10 kb以上長(zhǎng)片段DNA克隆和基因文庫構(gòu)建時(shí)，可與TaKaRa DNA Ligation Kit LONG (Code No. : 6024) 一起使用，效果很好。
*：與其他相同基因型的感受態(tài)細(xì)胞相比較。
對(duì)于pUC系列質(zhì)粒，可通過β-半乳糖苷酶的α-互補(bǔ)性，在培養(yǎng)基中添加X-gal進(jìn)行藍(lán)白篩選，以篩選陽性克隆。
X-Gal：5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside |
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| ■ 細(xì)胞濃度 |
| 1-2×109 bacteria/ml |
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| ■ Genotype |
| E. coli HST08 Premium： F-, endA1 , supE44 , thi -1 , recA1 , relA1, gyrA96 , phoA , Φ80d lacZ ΔM15,Δ(lacZYA - argF)U169 , Δ(mrr - hsdRMS - mcrBC), ΔmcrA , λ- |
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| ■ 保存 |
-80℃。
注意： 如果不在-80℃下保存，轉(zhuǎn)化效率將會(huì)降低。此時(shí)，在使用前，請(qǐng)使用附帶的pUC19 對(duì)照質(zhì)粒來確認(rèn)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。不能液氮保存。 |
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| ■ 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) |
[1] 轉(zhuǎn)化效率
轉(zhuǎn)入1 ng 的pUC19 plasmid，涂于含有ampicillin的L-plate進(jìn)行篩選。
轉(zhuǎn)化效率 : >1 x 108 colonies/μg pUC19 plasmid
[2] β-半乳糖苷酶的α-互補(bǔ)性
轉(zhuǎn)化pUC19 DNA時(shí)，含有100 μg/ml ampicilin 和 60 μg/ml X-Gal的L-agar plate上出現(xiàn)藍(lán)色菌落。 |
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| ■ 注意事項(xiàng) |
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80℃冷凍取出后請(qǐng)立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
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| 2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圓底 tubes (CORNING Code No. 352059 或 352057,等)，但效率可能會(huì)降低。 |
| 3. 當(dāng)使用100 μl感受態(tài)細(xì)胞時(shí)，加入不超過10 ng的高純度DNA樣品。否則轉(zhuǎn)化效率會(huì)降低。 |
| 4. 當(dāng)改變感受態(tài)細(xì)胞使用體積或tube類型時(shí)，適當(dāng)調(diào)整反應(yīng)條件。例如，當(dāng)使用1.5 ml microcentrifuge tubes時(shí)，42℃放置60秒而不是45秒。 |
| 5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)化效率可能會(huì)降低。 |
| ·L-broth：10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 N NaOH調(diào)整pH到7.5，使體系終體積為1 L，高壓滅菌。 |
| ·φ b-broth：5 g Yeast extract, 20 g Tryptone, 5 g MgSO4·7H2O，用1 N KOH調(diào)整pH到7.5，使體系終體積為1 L，高壓滅菌。 |
| ·L-plates： 10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 N NaOH調(diào)整pH到7.5，添加agar到1.5%，使體系終體積為1 L，高壓滅菌。 |
| 6. 當(dāng)使用X-Gal 時(shí)，按照以下操作進(jìn)行： |
| 將20 mg /ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml 的比例加入到agar media中。 |
| 7. 不建議將解凍的感受態(tài)細(xì)胞再次冷凍保存。但是，如果再次凍結(jié)不可避免，將細(xì)胞置于干冰/乙醇中迅速冷凍，置于-80℃保存。但是，轉(zhuǎn)化效率可能會(huì)降低至少一個(gè)數(shù)量級(jí)。 |
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京公網(wǎng)安備 110114000405號(hào)
增目的片段（灰）.png)
物純化（灰）.png)
化感受態(tài)細(xì)胞（黃）.png)
