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Lenti-X Provirus Quantitation Kit可以讓您快速確定轉(zhuǎn)導細胞混合或克隆群體中存在的整合慢病毒(前病毒)的拷貝數(shù)。該試劑盒包括用于測定前病毒拷貝數(shù)的引物、基因組DNA純化試劑盒、制備標準曲線的對照DNA，以及基于TB Green檢測的qPCR試劑（可檢測200次）。
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| 正確確定慢病毒的有效滴度 |
通過量化已整合到靶細胞核DNA中的慢病毒的數(shù)量，您可以正確確定慢病毒上清液原液的真實滴度（即有效滴度）。利用這個信息，可以用正確的MOI（感染復數(shù)）去感染細胞，讓您能夠預測將有多少病毒基因組會整合到細胞中。您也可以使用此方法來校準其他滴定方法，那些方法可以測量包裝細胞上清液中的病毒含量，但不能測定靶細胞中的功能性整合滴度。
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| 一致并且可預測的慢病毒轉(zhuǎn)基因表達 |
當使用慢病毒載體將基因?qū)胫涟屑毎麜r，表達水平會隨著MOI的增加而增加，因為更多的慢病毒拷貝會整合到細胞核DNA中。同樣，對于給定的病毒制劑，在不同目標細胞系中的有效MOI可能會因各個細胞系對慢病毒感染的敏感度不同而不同。Lenti-X Provirus Quantitation Kit可讓您評估任何細胞系中的轉(zhuǎn)導結(jié)果，而不受表達水平的影響，并且可確保不同細胞系間或使用不同病毒制劑間轉(zhuǎn)導水平一致。
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| ■ 概述/特點 |
· 預測不同實驗間一致的轉(zhuǎn)基因表達水平
· 比較多個細胞系的轉(zhuǎn)導數(shù)據(jù)
· 確保不同實驗或不同細胞系之間的拷貝數(shù)一致
· 包含純化10種基因組DNA和進行200 次TB Green qPCR反應試劑*
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* 此試劑盒中包含的引物旨在擴增HIV-1基因組包裝信號附近的的保守區(qū)域。這些引物與Takara Bio銷售的所有慢病毒載體和常用的慢病毒載體相兼容。如果不能確定該試劑盒是否與您的載體相兼容，請將您的載體序列發(fā)送至service@takarabiomed.com.cn，我們的技術(shù)支持團隊將很樂意為您確認引物的兼容性。
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| ■ 實驗例 |
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圖1. 測定靶細胞中整合的慢病毒拷貝數(shù)。使用快速qPCR方法確定前病毒含量。
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圖2. 慢病毒前病毒拷貝數(shù)會影響轉(zhuǎn)導細胞中轉(zhuǎn)基因的表達水平。使用AcGFP1慢病毒表達載體分別以高或低MOI感染HT1080細胞。感染后72小時，對細胞進行嘌呤霉素藥物選擇。一周后，選擇穩(wěn)定轉(zhuǎn)導的細胞克隆進行擴增和表達分析。使用流式細胞術(shù)確定AcGFP1的表達水平，并使用Lenti-X Provirus Quantitation Kit確定基因組DNA中的前病毒含量。該圖所示數(shù)據(jù)為低拷貝數(shù)（> 3; n = 8）和高拷貝數(shù)（> 9; n = 7）實驗組兩組合并數(shù)據(jù)。結(jié)果表明，前病毒含量越高，表達水平也就越高。
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圖3. 等量病毒感染細胞時，不同類型細胞獲得的前病毒（整合的慢病毒）拷貝數(shù)不同。 用等量的單一慢病毒原液（100 μl）感染HT1080、HeLa和HEK 293細胞。感染后72小時，使用嘌呤霉素對細胞進行藥物選擇。一周后，使用Lenti-X Provirus Quantitation Kit確定穩(wěn)定轉(zhuǎn)導細胞群的前病毒拷貝數(shù)。
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